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        请评价引物设计

        丁香园论坛

        1250
        请大家帮我评价我设计的引物,设计数次,总是感觉不满意,所以恳请大家顶力相助,我先谢谢大家了。我要克隆一个基因的一部分,sense DNA序列如下,383bp-638bp是我要扩增的目的基因,上下游多扩增15个bp关系不大,请指教。
        ccggcccgcg ccccgcaggc cgcccgccgc ccgcgccgcc atgggagtgg agggctgcac
               61 caagtgcatc aagtacctgc tcttcgtctt caatttcgtc ttctggctgg ctggaggcgt
              121 gatcctgggt gtggccctgt ggctccgcca tgacccgcag accaccaacc tcctgtatct
              181 ggagctggga gacaagcccg cgcccaacac cttctatgta ggcatctaca tcctcatcgc
              241 tgtgggcgct gtcatgatgt tcgttggctt cctgggctgc tacggggcca tccaggaatc
              301 ccagtgcctg ctggggacgt tcttcacctg cctggtcatc ctgtttgcct gtgaggtggc
              361 cgccggcatc tggggctttg tcaacaagga ccagatcgcc aaggatgtga agcagttcta
              421 tgaccaggcc ctacagcagg ccgtggtgga tgatgacgcc aacaacgcca aggctgtggt
              481 gaagaccttc cacgagacgc ttgactgctg tggctccagc acactgactg ctttgaccac
              541 ctcagtgctc aagaacaatt tgtgtccctc gggcagcaac atcatcagca acctcttcaa
              601 ggaggactgc caccagaaga tcgatgacct cttctccggg aagctgtacc tcatcggcat
              661 tgctgccatc gtggtcgctg tgatcatgat cttcgagatg atcctgagca tggtgctgtg
              721 ctgtggcatc cggaacagct ccgtgtactg aggccccgca gctctggcca cagggacctc
              781 tgcagtgccc cctaagtgac ccggacactt ccgagggggc catcaccgcc tgtgtatata
              841 acgtttccgg tattactctg ctacacgtag cctttttact tttggggttt tgtttttgtt
              901 ctgaactttc ctgttacctt ttcagggctg acgtcacatg taggtggcgt gtatgagtgg
              961 agacgggcct gggtcttggg gactggaggg caggggtcct tctgccctgg ggtcccaggg
             1021 tgctctgcct gctcagccag gcctctcctg ggagccactc gcccagagac tcagcttggc
             1081 caacttgggg ggctgtgtcc acccagcccg cccgtcctgt gggctgcaca gctcaccttg
             1141 ttccctcctg ccccggttcg agagccgagt ctgtgggcac tctctgcctt catgcacctg

           这是我自己设计的引物,
        Sense primer 5’-CGA GGATCC GTCAACAAGGA CCAGA-3’380-395bp
                              BamHI
        Anti-sense primer 5’ GCA GAATTC CTA GGAGAAGAGGTCATCG-3’623bp-638bp
                                EcoR I 终止密码
        总是不满意,请评价。
          Thanks
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