引物设计+合成

质粒与引物设计篇

效率，比如电转化比化学转化的效率更高。   3. 如何设计目的片段引物？ PCR 引物设计，是决定实验是否成功的重要一环，现有的 PCR 设计工具，比如‌Primer-BLAST (NCBI)、Primer Designer Tool (Thermo Fisher)、 Primer3 等都可以针对目标序列设计出相应的引物，可以根据目标序列特征、实验室资源来选择合适的引物设计工具。如果后续通过无缝克隆的方法构建载体，在设计 PCR 引物时，还需要将同源臂序列添加到上下游引物的两端。具体添加方法可参考所用的同源

PCR 引物设计小技巧，你 get 了吗？

子的第 3 位如扩增编码区域，引物 3' 端不要终止于密码子的第3位，因密码子的第 3 位易发生简并，会影响扩增的特异性与效率。 5、引物 3' 端不能选择 A，最好选择 T 引物 3' 端错配时，不同碱基引发效率存在着很大的差异，当末位的碱基为 A 时，即使在错配的情况下，也能有引发链的合成，而当末位链为 T 时，错配的引发效率大大降低，G、C 错配的引发效率介于 A、T之间，所以 3' 端最好选择 T。 6、碱基要随机分布 引物序列在模板内应当没有相似性较高，尤其是 3’ 端相似性较高的序列，否则容易

Primer 3 在线引物设计攻略

开始之前：其实非常简单，不需要你下载任何软件，但是你得有一台电脑能上网。当然，最重要的是，你要很清楚用于做引物的模板序列，至于怎么找模板序列，不再本次讨论范围。另外，要先对PCR目的序列的长度有个大致估计，好了，马上开始吧：第一步：找到Primer3的站点。 你不用记住这个站点，但是要记住“Primer3”这个词，然后打开GOOGLE首页，输入Primer3，跳出来的第一个项目就是了“Primer3 Input 0.4.0 ” 。第二步：贴上模板序列。 进入Primer3站点，可以看到一个引物设计