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        细胞免疫荧光步骤

        &丁香园

        6715

        免疫荧光技术(Immunofluorescence technique)又称荧光抗体技术,是标记免疫技术中发展最早的一种。它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。很早以来就有一些学者试图将抗体分子与一些示踪物质结合,利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。



        实验材料


        1.  细胞样品


        2. 试剂、试剂盒


        多聚甲醛 70% 甲醇 丙酮 PBS Triton BSA DAPI 染液 DABCO Tris 甘油


        3. 仪器、耗材

        玻片



        实验步骤


        第一天


        1. 在培养板中将已爬好细胞的玻片用 PBS 浸洗 3 次,每次 3 min;


        2. 用 4% 的多聚甲醛固定爬片 15 min, PBS 浸洗玻片 3 次,每次 3 min;


        3. 0.5%Triton X-100(PBS 配制) 室温通透 20 min(细胞膜上表达的抗原省略此步骤);

        第二天


        1. 加荧光二抗: PBST 浸洗爬片 3 次,每次 3 min,吸水纸吸干爬片上多余液体后滴加稀释好的荧光二抗,湿盒中 20~37℃ 孵育 1 h,PBST 浸洗切片 3 次,每次 3 min;注意:从加荧光二抗起,后面所有操作步骤都尽量在较暗处进行。


        2. 复染核:滴加 DAPI 避光孵育 5 min,对标本进行染核,PBST 5 min×4 次洗去多余的 DAPI;

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