Cell Cycle Staining Kit 细胞周期检测

联科生物有两种细胞周期检测试剂盒，在组分上，CCS01是DNA染色液和破膜剂的混合装；CCS012 为DNA染色液和破膜剂的独立包装。在用途上，CCS01可用于一步法活细胞细胞周期检测，固定细胞也 可用，但推荐用CCS012效果更佳；CCS012可用于活细胞和固定细胞的细胞周期检测。

 

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产品简介

碘化丙啶(Propidium iodide, PI)可插入碱基之间而与DNA结合，其对碱基几乎没有序列偏好，每4 - 5个碱基对可结合一个染料分子。PI也能与RNA结合，需要用核酸酶处理来区分RNA和DNA染色。一旦染料与核酸结合，其荧光会增强20 - 30倍。虽然其摩尔吸收率(吸光系数)相对较低，PI仍然具有较大的stokes位移，从而在滤光片选择恰当的情况下，仍能同时检测细胞核DNA和荧光标记的抗体。PI可用于荧光显微镜、激光共聚焦、流式细胞仪和荧光计。

PI为膜不通透性，被活细胞排斥，可用于鉴定死细胞和多色荧光复染。下面提供的操作步骤与很多细胞标记技术兼容，如直接或间接抗体检测技术、mRNA原位杂交、特异性的细胞结构染料等。在组织染色中可能要作修改。

本试剂盒包含50 ml DNA染色液和500 μl破膜剂，足够用于50次检测。

产品特点

• 即用型，操作简单
• 活细胞/固定细胞检测
• 常备现货

使用方法

一、可当天检测的活细胞样本

1. 收集2 × 10⁵ - 1 × 10⁶个细胞，离心弃上清。用PBS洗涤一次，离心弃上清。
2. 加入1 ml DNA Staining solution和10 μl Permeabilization solution，涡旋振荡5 - 10秒混匀。室温避光孵育 30分钟。
3. 选择最低上样速度，在流式细胞仪上进行检测。如需在荧光显微镜下观察，则离心细胞，弃上清，加 入新鲜缓冲液重悬。滴加1滴细胞悬液至载玻片，盖上盖玻片后使用合适的滤光片进行观察。

二、当天无法检测的活细胞样本

1. 按照下述方法固定，或其他合适的方法固定
      a. 收集2 × 10⁵ - 1 × 10⁶个细胞，离心弃上清。轻弹管壁，使沉淀重悬在残余的液体中，加入1 ml 室温 下的PBS。
      b. 将细胞缓慢加入至3 ml无水乙醇(-20℃预冷)中，边加边高速搅拌。-20℃固定过夜，可保存数月。
2. 检测当天，将固定细胞离心，弃去乙醇，轻弹管壁使沉淀松散，加入2 - 5 ml 室温下的PBS，放置15 分钟使细胞再次水化。离心，弃上清。
3. 加入1 ml DNA staining solution，涡旋振荡5 - 10秒混匀。室温避光孵育30分钟。
4. 选择最低上样速度，在流式细胞仪上进行检测。如需在荧光显微镜下观察，则离心细胞，弃上清，加 入新鲜缓冲液重悬。滴加1滴细胞悬液至载玻片，盖上盖玻片后使用合适的滤光片进行观察。