细胞免疫荧光步骤需要注意的问题？

具体步骤是： 1、细胞爬片 2、4%多聚甲醛固定10 min(固定细胞器用预冷的70%甲醇+30%丙酮) 3、PBS漂洗5 min 4、0.5% Triton 穿孔15min(丙酮固定法不用透化处理) 5、PBS漂洗2次，每次5 min 6、1%BSA封闭30 min 7、加入1%BSA稀释的一抗，于37℃杂交2 h 8、PBS漂洗2次，每次5 min 9、加入1%BSA稀释的二抗，于37℃杂交1 h 10、PBS漂洗2次，每次5 min 11、5 ug/ml DAPI染色2 min 12、抗淬灭封片剂封片 抗淬灭封片剂、2.5% DABCO (w/v)、50mM Tris(pH8.0)、90%甘油、0.25g DABCO、9ml甘油、0.5ml 1M Tris(Ph8.0) 、0.5ml ddH2O、70℃溶解，-20℃保存