细胞培养

无血清培养基一些基本配方

PriCells –正常小鼠原代真皮纤维原细胞培养一、实验试剂1、培养基： PriCells Medium + 10% FBS + 1% P/S + PriCells Supplement2、冻存液： PriCells Medium + 20% FBS + 10% DMSO3、洗涤液： 1 × PBS （pH 7.4 ）+ 1% P/S4、染色液： 0.4% Trypan Blue 5、消化液： ...

正常小鼠原代骨骼肌细胞培养

PriCells: 原代细胞分离和培养基本步骤

PriCells：原代微血管内皮细胞（Primary Microvascular Endothelial Cells）的体外分离培养

特异性抗体免疫磁珠分选、分离、纯化原代细胞用包被特异性抗体或抗IgG抗体的免疫磁珠分选、分离、纯化原代细胞的方法。可以在几分钟内从复杂的原代细胞混合物中分离出很高纯度的目的原代细胞。用包被特异性抗体或抗IgG抗体可以分离出非常纯的原代细胞群体，而且有极好的回收率和存活率。依据细胞频率和标记表达水平的不同，原代细胞的纯度可达95%-99.9%。

PriCells: 小鼠单个核细胞分离去除脾脏细胞悬液中的红细胞脾脏细胞悬液在进行淋巴细胞计数之前最好先去除红细胞（RBC）。胸腺和淋巴结细胞悬液则不必去除红细胞。脾脏细胞的亚群分离也需先去除红细胞。

原代细胞复苏的基本操作方法

从小鼠脾脏分离小鼠天然杀伤细胞基本方案：由于所用Mab只能检测C57BL背景小鼠体内的NK1.1CD3-NK细胞，故本方案适用于C57BL/6或者C57BL/10（以及H2b、d、q同系小鼠）小鼠脾脏细胞。清楚杂细胞所用的单克隆抗体的活性对本方案至关重要。单克隆抗体可以买到，并且其杂交瘤可以从ATCC得到，因此建议检测单克隆抗体的活性以保证实验成功。最佳补体和细胞浓度也需要通过 ...

牛或猪大血管原代内皮细胞的分离-灌注酶消化法实验材料：1. 牛或猪2. PBS，含青霉素100U/ml和链霉素100μg/ml3. 0.1%Ⅰ型胶原酶4. 眼科剪，眼科镊5. 慕丝线6. 离心管（15ml、50ml）实验方法：1. 分离牛或猪的主动脉等大血管，长15-20cm，用丝线结扎血管各分支后，取出主动脉。放入含青霉素100U/ ...

人或动物脑毛细血管原代内皮细胞的分离实验材料：1. 人或动物的脑部毛细血管2. PBS，含青霉素100U/ml和链霉素100μg/ml3. 10μg/ml DNaseⅠ和1mg/ml胶原酶4. 250g/L BSA5. 眼科剪，眼科镊6. 60μm尼龙筛、150μm尼龙筛和230μm尼龙筛7. 离心管（15ml、50ml ...

动物气管和支气管假复层纤毛柱状上皮细胞的培养实验材料：1.大鼠或兔的气管和支气管2.0.1%中性蛋白酶或0.125%胰蛋白酶和0.01%EDTA混合消化液3.不含Ca2+和Mg2+的1×PBS（pH7.4），含青霉素100u/ml和链霉素100μg/ml，pH7.44.解剖剪、解剖镊、眼科剪，眼科镊5.一次性注射器（1ml或5ml）6.200目不锈钢网筛7.离心 ...

动物淋巴管内皮细胞的分离基本方案2：植块培养法实验材料：1.哺乳动物胸导管或肠系膜淋巴管2.1%明胶铺底，置超净台晾干3.1×PBS，含青霉素100u/ml和链霉素100μg/ml，pH7.44.眼科剪，眼科镊5.慕丝线（7号线）、细铁丝6.离心管（15ml、50ml）实验方法：1.处死动物后，打开胸腔，分离胸导管，在胸导管上端结扎，切取10-15cm的一段。将胸 ...

PriCells:小鼠乳腺上皮细胞培养实验材料：1.10-12周龄妊娠小鼠乳腺组织2.不含Ca2+和Mg2+的1×PBS，添加200000IU/L青霉素、200mg/L链霉素和200000U/L庆大霉素，pH7.43.FBS、含5%牛血清白蛋白（BSA）的PBS液或DMEM4.0.05%Ⅰ型胶原酶50ml、0.05%蛋白酶50ml、0.1%DNaseⅠ型、结晶紫（0.1%）/枸橼酸（0. ...

PriCells:正常人表皮朗格汉斯细胞的培养实验材料：1.多来自外科手术的临床病人或死亡时间不超过24h尸体的胸、腹部皮肤；2.不含Ca2+和Mg2+的1×PBS，添加200000IU/L青霉素、200mg/L链霉素，pH7.2；3.培养用液：①RPMI1640完全培养液，由RPMI1640培养基添加10%人AB血清、2mol/L谷氨酰胺、50μg/ml庆大霉素和1μg/ml消炎痛；②D ...

PriCells:正常人表皮黑色素细胞的培养实验材料：1.临床活检获取的正常人皮肤材料或新生儿阴茎包皮；2.不含Ca2+和Mg2+的1×PBS，添加200000IU/L青霉素、200mg/L链霉素，pH7.2；3.黑素细胞培养液和培养基中各种添加剂的配制：包括以下种类：①胰岛素。贮存液为5mg/ml，即将0.5g的胰岛素溶于1ml0.01mol/L的HCl液中，双蒸水加至100ml，过滤 ...

正常大兔主动脉平滑肌细胞培养实验材料：1.正常大兔主动脉2.不含Ca2+和Mg2+的1×PBS，添加200000IU/L青霉素、200mg/L链霉素，pH7.23.消化液：0.125%胰蛋白酶，0.1%胶原酶Ⅰ4.细胞培养瓶（T25）5.手术刀、解剖剪、解剖镊、眼科剪，眼科镊6.网筛（100目）7.离心管（15ml、50ml）实验方法：1.处死大兔，分离出主动脉 ...

正常动物肺肥大细胞的培养实验材料：1.正常动物的肺组织；2.不含Ca2+和Mg2+的1×PBS，添加200000IU/L青霉素、200mg/L链霉素，pH7.2；3.TE液：Tyrode液加入2mmol/LEDTA。Tyrode液含137mmol/LNaCl、2.7mmol/LKCl、0.36mmol/LNaH2PO4、5.55mmol/L葡萄糖；4. ...

PriCells:正常大鼠巨噬细胞的培养实验材料：1.成年大鼠或小鼠，采用腹腔取材法2.不含Ca2+和Mg2+的1×PBS，添加200000IU/L青霉素、200mg/L链霉素，pH7.23.培养基：RPMI1640、Ham’sF12等均适于巨噬细胞的培养。大多数巨噬细胞的培养可加10%-40%的血清，小鼠巨噬细胞加10%小牛血清，用无血清培养基亦可。新生小牛血清中含有抗体，能刺激巨噬细 ...

正常大鼠皮肤肥大细胞的培养实验材料：1.正常大鼠（体重150g—250g）的皮肤；2.不含Ca2+和Mg2+的1×PBS，添加200000IU/L青霉素、200mg/L链霉素，pH7.2；3.消化液：1g/L胶原酶和1g/L透明质酸酶（1:1，v/v）混合消化液，用含10mmol/LHEPES和20%FBS的HBSS配制；4.冲洗液：改良的Tyrode液，含137mm ...