• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        正常大兔主动脉平滑肌细胞培养

        互联网

        1687

        实验材料:

        1. 正常大兔主动脉

        2. 不含Ca2+ 和Mg2+ 的1×PBS,添加200000IU/L青霉素、200mg/L链霉素,pH7.2

        3. 消化液:0.125%胰蛋白酶,0.1%胶原酶Ⅰ

        4. 细胞培养瓶(T25)

        5. 手术刀、解剖剪、解剖镊、眼科剪,眼科镊

        6. 网筛(100目)

        7. 离心管(15ml、50ml)

        实验方法:

        1. 处死大兔,分离出主动脉,放入预冷的含双抗的1×PBS(pH=7.2)反复清洗3次。以洗去表面血丝和粘膜;

        2. 将清洗过的大动脉剪成2.5 ~ 3cm的血管段,剥离外膜;

        3. 将去外膜的血管段放入培养皿中,纵向剪开管壁,然后使内膜朝上,用小刀片轻轻刮去内膜细胞。加1×PBS洗涤中膜3次,将中膜剪成1mm3的组织块;

        4. 将组织块移入50ml离心管中,加入适量0.1%胶原酶Ⅰ溶液,在37℃恒温箱中消化1 ~ 3h,至组织块成絮状为止;

        5. 1000r/min,离心5min,去上清。再加入0.125%胰蛋白酶溶液,37℃水浴中搅拌消化5 ~ 10min。用含血清的培养基终止消化,吸管轻轻吹打2-3min,以得到分散的平滑肌细胞;

        6. 过100目网筛,收集滤液,1000r/min离心5min,弃上清;

        7. 加培养液重悬细胞、调整细胞浓度至1×105 个/ml,接种于培养瓶中,置于37℃、5%CO2 的培养箱中培养;

        8. 两天后第一次换液,之后每天换液一次。

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序