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        小鼠单个核细胞分离去除脾脏细胞悬液中的红细胞

        互联网

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        小鼠单个核细胞分离去除脾脏细胞悬液中的红细胞
        脾脏细胞悬液在进行淋巴细胞计数之前最好先去除红细胞(RBC)。胸腺和淋巴结细胞悬液则不必去除红细胞。脾脏细胞的亚群分离也需先去除红细胞。

        附加材料:

        ACK裂解缓冲液

        实验方案:

        1. 每个脾脏用约5ml裂解缓冲液悬浮脾脏细胞;一个12ml试管可用于裂解一个或两个脾脏,也可以用50ml离心管裂解更多的脾脏。
        2. 室温孵育5min,间以摇动。
        3. 加入洗液直至装满容器,以低速离心机上以200g离心10min后弃上清。再洗沉淀一次并以适量培养基重悬以便下一步操作(如去除死细胞、细胞计数或者细胞分离)。

        附录:

        ACK裂解缓冲液
        8.29g NH4 Cl(0.15mol/L)
        1g KH2 CO3 (10.0mmol/L)
        37.2mg Na2 EDTA(0.1mmol/L)
        加800ml水,用1mol/L盐酸调PH至7.2~7.4
        补加水至1L
        0.2μm滤膜过滤除菌
        室温保存
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