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        正常大鼠巨噬细胞的培养

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        实验材料:

        1. 成年大鼠或小鼠,采用腹腔取材法

        2. 不含Ca2+和Mg2+ 的1×PBS,添加200000IU/L青霉素、200mg/L链霉素,pH7.2

        3. 培养基:RPMI1640、Ham`s F12等均适于巨噬细胞的培养。大多数巨噬细胞的培养可加10%-40%的血清,小鼠巨噬细胞加10%小牛血清,用无血清培养基亦可。新生小牛血清中含有抗体,能刺激巨噬细胞成熟,也可用乳清蛋白培养

        4. 动物解剖台或蜡板1个,带钩眼科镊子2支,解剖剪1个,10ml注射器1个,针头数支,离心管2支,吸管数支,培养瓶数个,血细胞计数器1个,Eagle液,肝素(10U/ml)30ml,Eagle培养液(含10%小牛血清和青霉素、链霉素)50ml

        实验方法:

        1. 实验前3d,向每只小鼠腹腔内注入无菌硫羟乙酸肉汤1ml;

        2. 引颈杀死动物,手提鼠尾将全鼠浸入70%乙醇中3-5s。置动物于解剖台上,用针头固定四肢,双手持镊撕开皮肤拉向两侧,暴露出腹膜,但勿伤及腹膜壁;

        3. 再用70%乙醇擦洗腹膜壁后,用注射器吸10ml Eagle液注入腹腔中,同时从两侧用手揉压腹膜壁,令液体在腹腔内充分流动;

        4. 用针头轻轻挑起腹壁,使动物体微倾向一侧,使腹壁中液体集中于针头下吸取入针管内。小心拔出针头,把液体注入离心管中,1000r/min,离心10min后,去上清,加10ml Eagle培养基;

        5. 计数细胞,每只小鼠可产生2×107 —3×107 个细胞,其中90%以上为巨噬细胞。为纯化培养细胞,去除其他白细胞,接种数小时后,去除培养液,用Eagle液冲洗1—2次后,除去漂浮的细胞,得到贴壁的巨噬细胞。再加新Eagle培养液置37℃、5%CO2 温箱中培养。

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