RNA原位杂交

在所选基因的启动子后 50-100个碱基自5’-端开始寻找基因序列中的23个碱基，最好是5‘- AA（N19）TT -3’ （N是任何碱基）如果找不到四个以上AA（N19）TT，则用 AA（N21）补足。如果找不到四个以上AA（N21），则用 NA（N21）补足。所选定序列中，G和C的数目的总和在总数（23）的35-55%. 满足以上1-5项要求的片段数目如果不足四个，将G和C的数目的总和放宽至总 ...

miRNA mimics是模拟生物体内源的miRNAs，运用化学合成的方法合成，能增强内源性miRNA的功能。 miRNA inhibitor是化学修饰的专门针对细胞中特异的靶miRNA的抑制剂。 近年来人工合成的miRNA（artificial miRNA，amiRNA）已经成功应用于沉默预期靶基因的表达及其功能研究， 人工合成的miRNAs既能够特异性地沉默单一基因，也可以同时沉默多个相关 ...

1 普通阴性对照siRNA实验应该有阴性对照； 通用阴性对照为与目的基因的序列无同源性的普通阴性对照； Scrambled阴性对照和选中的siRNA序列有相同的组成，但是和mRNA没有明显的同源性； 阴性对照需要确定和目的靶细胞中其它基因同源性很低。2 荧光标记阴性对照RNAi negative control与哺乳动物基因无同源性； 通过标记荧光，可以方便地在荧光显微镜下观察转染情况； 可用 ...

miRNA微RNA（microRNAs，miRNA）是长度在21-23个核苷酸之间的单链RNA片段，调节基因的表达。miRNA由基因编码，从DNA转录而来，但不翻译成蛋白。初级转录产物（primary tranｓｃｒｉｐｔs，pri-miRNA）缩短其颈环结构得到功能性的miRNA。成熟的miRNA分子与一个或更多个mRNA分子部分互补，其主要功能是下调基因的表达。dsRNA双链RNA（doub ...

­siRNA Small interfering RNA是一种小RNA分子（~21-25核苷酸），由Dicer（RNAase Ⅲ家族中对双链RNA具有特异性的酶）加工而成。SiRNA是siRISC的主要成员，激发与之互补的目标mRNA的沉默。 越来越多的研究人员开始采用小分子干扰RNA（small interfering RNAs，siRNAs)来抑制特定的哺乳动物基因表达。siRNA是一种短 ...

摘自丁香园上海孤儿的帖子，用蛋白酶K替代DEPC。蛋白酶 K 的妙用，我曾经在别的论坛发表。坦率地说，蛋白酶 K 的这个用途，是我的得意之作之最。不是因为该发现有什么创新，而是因为它的实用性。当别人还在讨论 DEPC 有什么毒性，讨论那一家公司的 DEPC 好时，我早就在使用蛋白酶 K 替代 DEPC 实现灭活 RNase A 的目的了。看这篇东西，我不知道大家的最大担心是什么；最早我的最大担心是 ...

越来越多的研究人员开始采用小分子干扰RNA（small interfering RNAs，siRNAs)来抑制特定的哺乳动物基因表达。siRNA是一种短片断双链RNA分子， 能够以同源互补序列的mRNA为靶目标降解特定的mRNA，这个过程就是RNA干扰途径（RNA interference pathway）。RNAi的应用包括功能基因组学，药物靶筛选，细胞信号传导通路分析等等。 目前为止较为 ...

从石蜡包埋肺癌组织提取RNA检测PML 基因转录的研究赵志龙 宗志红 李建新 刘宏旭 赵惠儒【摘要】 背景与目的 甲醛固定石蜡包埋组织（FPE）包含大量临床病理信息，同时还含有大量的基因和蛋白物质可用来研究临床意义。本研究的目的是探讨从FPE中提取RNA的可能性，检测急性早幼粒细胞白血病基因（PML）在肺癌FPE中的转录表达。方法 选取前期经免疫组织化学染色证实无PML蛋白表达的40例肺癌FPE， ...

大多植物病毒RNA为单链RNA，并且其极性与mRNA极性相同，植物病毒RNA提取较为简单，一般使用酚氯仿即可获得满意结果。 一、材料 提纯TMV病毒液（10mg/ml）。 二、设备 冷冻台式离心机，低温真空干燥仪，电泳仪，电泳槽。 三、试剂 TE-饱和酚:氯仿（1:1），氯仿，3M NaAc(pH5.2)，乙醇(100%和70%)，TE缓冲液，无RNA酶的双菌水。 四、操作步骤 1、取一eppen ...

实验目的 1.学习从兔肝中提取RNA的方法。 2.通过地衣酚显色法测定RNA的含量。 实验原理 细胞内大部份RNA均与蛋白质结合在一起，并且多以核蛋白的形式存在。因此，分离制备RNA时，首先遇到的是必须使RNA与蛋白解离，并除去蛋白质。由于RNA的种类来源和存在形式不同，所用的制备方法各异，一般常用的方法有，盐酸胍法，去污剂法和苯酚法。其中，以苯酚法使用较为广泛。产品纯度高，适合小规模生产。 动物 ...

试剂和器皿所有试剂都用DEPC水配置，所有器皿都在180℃烘8hr或者在双氧水中泡半小时以上`所有的离心管和PIPET都用新的。DEPC水。RNA Extraction Buffer: 0.2MTris-Cl （Ph 8.0），0.4M LiCl，25mM EDTA， 1% SDS。 3MNaAc pH5.2。2M LiCl。RNase free的水饱和酚。氯仿。无水乙醇。70%乙醇。DN ...

1.1 匀浆1) 每个无菌的2 ml圆底离心管中加入1ml TRIZOL试剂，每个大鼠的腺垂体从-80°C取出后立即于预冷的TRIZOL试剂里用POLYTRON组织匀浆器（瑞士）进行匀浆。【注：1. 匀浆液的量按每50-100 mg组织加1 ml TRIZOL，样品的体积不能超过匀浆液体积的10%。 2. TRIZOL试剂用前应于4°C保存，操作时应带手套和口罩。3. 匀浆器头用前需在3% H2O ...

一、实验原理RNA是基因表达的中间产物，存在于细胞质与核中。对RNA进行操作在分子生物学中占有重要地位。获得高纯度和完整的RNA 是很多分子生物学实验所必需的，如Northern杂交、cDNA合成及体外翻译等实验的成败，在很大程度上取决于RNA的质量。由于细胞内的大部分RNA是以核蛋白复合体的形式存在，所以在提取RNA时要利用高浓度的蛋白质变性剂，迅速破坏细胞结构，使核蛋白与RNA分离，释放出RN ...

摘要棉花组织富含多糖、棉酚等次生代谢物质 较难提取高质量的RNA。本研究在前人方法的基础上对快速提取棉花组织总RNA 的方法进行了探讨。利用改进的CTAB 异硫氰酸胍裂解缓冲液 获得的RNA完整性好 无DNA 污染 含量高 每克鲜组织能提取015mg 总RNA OD260/ OD280比值均在117～210之间。该方法不但适用于叶片提取总RNA 而且在根、花冠、种子、发育的纤维中均能提取出高质 ...

真核生物的基因组是DNA，为什么不直接从DNA PCR得到我们需要的基因呢？因为真核生物的基因含有大量的非编码区，称为内元（intron），真正编码蛋白的区段是被这些内元隔开的，这些编码区叫做外元（exon）。真核生物的DNA转录成为RNA之后，经过剪切和拼接，去掉这些非编码区，才形成成熟的mRNA，由mRNA再翻译成蛋白质。所以，如果直接从真核生物的基因组DNA获取目的基因，克隆再表达，试图获取 ...

RNAi的定义： 目前对RNAi (RNA interference)的定义有很多种，不同的资料对其定义的侧重点也不尽相同，如果将RNAi看作一种生物学现象，可以有以下定义：① RNAi是由dsRNA介导的由特定酶参与的特异性基因沉默现象它在转录水平、转录后水平和翻译水平上阻断基因的表达。② RNAi是有dsRNA参与指导的，以外源和内源mRNA为降解目标的转基因沉默现象。具有核苷酸序列 ...

DNA，RNA和蛋白质是三种重要的生物大分子，是生命现象的分子基础。基因组织DNA中的基因通过转录为mRNA并进一步翻译为蛋白质，很多种类型的蛋白质在最终发挥功能时又经历磷酸化、糖基化、酶原激活等翻译后修饰。DNA的遗传信息决定生命的主要性状，而mRNA在信息传递中起很重要的作用。其它两大类RNA，rRNA和tRNA，同样在蛋白质的生命合成物中发挥不可替代的重要功能。因此，mRNA、rRNA、tR ...

1、细胞生长至足够数量。2、吸去培养液，加入适量胰酶消化至细胞变小变圆。3、加入培养液中止消化并吹打。4、移至离心管，1000转/分离心5分钟。5、倒去上清，加入适量PBS并吹打，离心；重复两次。6、倒去上清，加入适量1mlPBS并吹打，移至EP管，离心。7、加入1mlTrizol并吹打，迅速放至-80℃冰箱保存。 (责任编辑：大汉昆仑王) ...

鼠脑RNA提取、RT－PCR及GST融合蛋白纯化一．鼠脑RNA提取（1）RNA提取常用3种方法：A.异硫氰酸胍、氯化铯密度梯度分离植物RNAB.SDS－酚－氯仿法C.硫氰酸胍－酚－氯仿法在制备用于反转录PCR的RNA时最实用（2）总RNA的提取方法是基于RNA与其他胞内大分子在溶解性和沉降性上的差异得以实现的，提取基本步骤：1.破碎细胞2.RNase失活3.RNA去蛋白4.RNA与其他大分子的物理 ...

1、血液收集：最好用肝素抗凝，因为EDTA可能会对后续的pcr有影响，因为EDTA会螯合pcr反应中的Mg2+，也可以根据实验的具体要求看选择怎么样的抗凝。2、白细胞的分离：一般选择1.5ML新鲜的血液，或选取冷冻的5ML的血液（冷冻血液的保存：先液氮速冻，再置于-80°保存），或隔天的5ML的血液，就可以分离到比较多的白细胞了。可以选择溶红素（BD公司的）或红细胞裂解液按一定的比例（1：3或1： ...