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        siRNA,shRNA,dsRNA,miRNA

        互联网

        4078

        miRNA

        微RNA(microRNAs,miRNA)
        是长度在21-23个核苷酸之间的单链RNA片段,调节基因的表达。
        miRNA由基因编码,从DNA转录而来,但不翻译成蛋白。
        初级转录产物(primary transcripts,pri-miRNA)缩短其颈环结构得到功能性的miRNA。
        成熟的miRNA分子与一个或更多个mRNA分子部分互补,其主要功能是下调基因的表达。
         
        dsRNA
        双链RNA(double-stranded RNA, dsRNA)是一种有互补链的RNA,
        与细胞中发现的DNA相似,dsRNA构成了一些病毒(双链RNA病毒)的基因组。
        像病毒RNA或siRNA 之类的双链RNA能够促发真核细胞中的RNA干扰,引起脊椎动物中的干扰素反应。 

         shRNA
        小发卡或短发卡RNA(a small hairpin RNA or short hairpin RNA, shRNA)
        是一段具有紧密发卡环(tight hairpin turn)的RNA序列,常被用于RNA干扰沉默靶基因的表达。
        利用载体把shRNA导入细胞,载体中的U6 启动子确保shRNA总是表达;
        这种装载了shRNA载体可被传递到子代细胞中去,从而使基因的沉默可被遗传。
        shRNA的发卡结构可被细胞机制切割成siRNA
        然后siRNA 结合到RNA诱导沉默复合物上(RNA-induced silencing complex,RISC),
        该复合物能够结合到目的mRNAs并将其降解。
        shRNA 是由RNA 聚合酶Ⅲ转录的,
        哺乳细胞中的shRNA产物有时会促使细胞产生干扰素反应(细胞遇到病毒侵袭时做出的自我防卫反应),
        而miRNA中却不会遇到这种问题(miRNA是由RNA聚合酶Ⅱ转录,与转录mRNA的聚合酶相同)。
        shRNA也被用于植物和其它系统中,在这些系统中不需要U6启动子的驱动。
        在植物中,常用的增强表达的启动子是CaMV35S(cauliflower mosaic virus 35S),
        在这种情况下,RNA聚合酶Ⅱ参与了转录,起始RNA干扰。

        siRNA
        小或短干扰RNA(small/short interfering RNA, siRNA
        是一类20-25个核苷酸长度的双链RNA分子,其主要在RNAi通路中起作用,干扰特异基因的表达。此外siRNA 在RNAi相关的通路中也起作用,如抗病毒机制,基因组染色体结构的塑造等。其结构是一段完全互补的RNA双链,两端各有两个未互补的的碱基。
        最后做一下小结,miRNA,siRNA ,dsRNA和shRNA都是RNA干扰技术中用到的小分子RNA,其不同之处在miRNA 是单链RNA,其余均为双链RNA;siRNA 和dsRNA相似;shRNA需通过载体导入细胞后,然后利用细胞内的酶切机制得到siRNA 而最终发挥RNA干扰作用.

        siRNA&miRNA
        往往是外源引起的,
        如病毒感染和人工插入dsRNA之后诱导而产生,
        属于异常情况是生物体自身的一套正常的调控机制。
        来源
        长链dsRNA
        发夹状pre-miRNA
        分子结构
        siRNA 是双链RNA,3‘端有2个非配对碱基,通常为UU
        miRNA是单链RNA
        对靶RNA特异性
        较高,一个突变容易引起RNAi沉默效应的改变
        相对较低,一个突变不影响miRNA的效应
        作用方式
        RNAi途径:生物合成,成熟过程,由dsDNA在Dicer酶切割下产生;发生在细胞质中
        miRNA途径:pri-miRNA在核内由一种称为Drosha酶处理后成为60nt的带有茎环结构的Precursor miRNAs (pre-miRNAs);这些pre-miRNAs在转运到细胞核外之后再由Dicer酶进行处理,酶切后成为成熟的miRNAs;发生在细胞核和细胞质中
        Argonaute (AGO) 蛋白质
        各有不同的AGO蛋白质
        各有不同的AGO蛋白质
        互补性(complementarity)
        一般要求完全互补
        不完全互补,存在错配现象
        RISCs的分子量不同
        siRISCs
        miRISCs/miRNP
        作用机制
        单链的siRNA 结合到RISC复合物中,引导复合物与mRNA完全互补,通过其自身的解旋酶活性,解开siRNAs,通过反义
        siRNA 链识别目的mRNA片段,通过内切酶活性切割目的片段,接着再通过细胞外切酶进一步降解目的片段。
        siRN 也可以阻遏3′UTR具有短片断互补的mRNA的翻译(off target)。
        成熟的miRNAs 则是通过与miRNP核蛋白体复合物结合,识别靶mRNA,并与之发生部分互补,从而阻遏靶mRNA的翻译。在动物中,成熟的单链miRNAs与蛋白质复合物miRNP结合,引导这种复合物通过部分互补结合到mRNA的3′UTR(非编码区域),从而阻遏翻译。除此之外,miRNA也可以切割完全互补的mRNA。
        加工过程
        siRNA 对称地来源于双链RNA的前体的两侧臂
        miRNA是不对称加工,miRNA仅是剪切pre-miRNA的一个侧臂,其他部分降解。
        对RNA的影响
        降解目标mRNA;影响mRNA的稳定性
        在RNA代谢的各个层面进行调控;与mRNA的稳定性无关
        作用位置
        siRNA 可作用于mRNA的任何部位
        miRNA主要作用于靶标基因3′-UTR区
        生物学意义
        siRNA 不参与生物生长,是RNAi的产物,原始作用是抑制转座子活性和病毒感染
        miRNA 主要在发育过程中起作用,调节内源基因表达
        (责任编辑:大汉昆仑王)
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