分子生物学实验

实验分类：

免疫学实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

介绍了一种受磷酸耗调节的能有效介导反转录载体质粒D N A 进入细胞的反转录病毒包装系统的转染方法。介绍了基于P C R 技术检测 B 细胞发育过程中的同型转换。用P C R 检测稀有 m R N A ，分别为 P C R 对人或小鼠的 T C R 可变区基因进行定性和定量，通过 P C R 产物克隆和测序来研究表达基因的连接多样性。提供了 R N A 酶保护实验方案， R N A 酶保护分析是一种敏感和定性的方法，检测 8〜1 2 种基因的相对转录水平。
作者：J.E.科利根等,译者：曹雪涛等，本实验来自「精编免疫学实验指南」

来源：丁香实验

操作方法

293T 细胞包装和扩增反转录病毒

基本方案 1 磷酸钥/DNA 沉淀瞬时转染 Phoenix 反转录包裝细胞

免疫球蛋白融合蛋白的构建

基本方案 1 免疫球蛋白融合蛋白的构建材料编码靶基因的 D N A

单链抗体的噬菌体展示技术

基本方案 1 全套单链抗体噬菌体载体的构建材料新鲜分离的小鼠脾脏或者 IO7 杂交瘤细胞（单元 undefined3) R N A 提取试剂 R T -P C R 试剂 D E P C 水寡核苷酸引物（表 14. 3.1) DNA marker 琼脂糖胶回收试剂盒（Qiaquick Gel Ex

整体培养中同型转换重排的 PCR 检测

基本方案 1 通过转换接头的直接 PCR 材料（带 V 项目见附录 1) 外周血分离的单核细胞（P B M C ; 单元 8.1) I M D M -I O 完全培养基重组人 IL-4 (rfIL-4; 表 5. 0 •1)

PCR 检测细胞因子 m R N A 的表达

基本方案定量 IL -2 mRNA表达水平材料内参照：转录质粒载体（含有临床生物检测标本相关的c D N A )胍盐溶液50 U/ul RNasin5 X 反转录酶缓冲液0.5m g / m l olig (d T )16l m g /m l 乙酰化的B S A4d N T P 混合液200U /ul M o - M u L V 反转录酶1 〇 X 无 M g C l 2 P

P C R 检测人 T 细胞受体基因的表达

基本方案 PCR检测人 T 细胞受体基因的表达

P C R 检测小鼠 T 细胞受体表达

基本方案 I P C R 分析小鼠 T C R 基因表达材料正常小鼠的组织匀浆或者是 H B S S 制备的单个细胞悬液（IO4〜IO7) (附录 1) 无菌水

多探针核糖核酸酶保护试验同时测定 mRNA 表达

基本方案多探针核糖核酸酶保护试验材料 R i b o Q u a n t 体外转录试剂（B D Pharmingen) 包含下面： 40U /ul RNasin G A C U 库（2.75m m o l / L G T P /2.75m m o l / L A T P / 2.75m m o l / L

端粒长度和端粒酶活性的分析

基本方案 I Southern 杂交检测传统凝胶电泳中末端端粒 D N A 限制性片段(TRF) 的端粒长度材料基因组 D N A (试剂盒分离）和限制性内切核酸酶和反应缓冲液琼脂糖（D N A 级） 1 〇 X T B E 或 T A E 6 X D N A

T C R 库的抗原谱 / 免疫扫描技术分析

基本方案 1 人和小鼠TCR受体库多样性的免疫扫描技术分析材料