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- 2025年12月29日
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上海达为科生物科技有限公司
- 服务名称：
细胞凋亡实验
一、细胞凋亡检测方法的分类
根据检测原理可分为以下三类：
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形态学检测
- 显微镜观察：通过HE染色、吖啶橙染色等，直接观察细胞核固缩、染色质边缘化、凋亡小体形成等特征。
- 电镜观察：透射电镜下可见凋亡细胞膜完整但核碎裂成凋亡小体。
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生化标记检测
- Annexin V/PI双染法：利用Annexin V结合凋亡早期外翻的磷脂酰丝氨酸（PS），PI标记坏死细胞，通过流式细胞术区分活细胞、早期凋亡、晚期凋亡及坏死细胞。
- 线粒体膜电位检测：采用JC-1等染料检测线粒体膜电位变化，反映凋亡早期线粒体功能异常。
- Caspase活性检测：通过荧光底物或免疫印迹分析Caspase家族酶活性变化。
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分子生物学检测
- TUNEL法：标记DNA断裂的3'-OH末端，通过荧光显微镜或流式检测凋亡细胞。
- DNA电泳（DNA Ladder）：提取DNA后琼脂糖电泳观察180-200bp的阶梯状条带。
二、常用实验方法与操作要点
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Annexin V/PI双染流式检测
- 步骤：
（1）胰酶消化贴壁细胞（避免含EDTA的消化液）；
（2）Binding Buffer重悬细胞；
（3）加入Annexin V-FITC和PI避光孵育15分钟；
（4）流式分析，区分四象限细胞群。 - 注意事项：
- 贴壁细胞需轻柔处理避免机械损伤；
- 避免长时间固定或反复冻融导致假阳性。
- 步骤：
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TUNEL法
- 原理：末端转移酶标记断裂DNA，适用于组织切片或细胞悬液。
- 优化点：需设置阳性对照（如DNase处理）和阴性对照，排除非特异性信号。
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线粒体膜电位检测
- 染料选择：JC-1在膜电位正常时形成红色聚集体，凋亡时转为绿色单体。
- 应用场景：适用于早期凋亡检测，需结合其他方法验证。
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文献和实验一、遗传变异细胞和正常细胞1.小鼠类3T3 胚胎成纤维细胞 L929 成纤维细胞3T3/e 成纤维细胞 Mo-MuLV/3T3 Mo-MuLV感染的3T33T3TK 成纤维细胞 NIH3T3 NIH Swiss小鼠胚细胞3T6 胚胎成纤维细胞 *PA317 胚胎成纤维细胞Ana-1 巨噬细胞 SRSV/3T3 SRSV转化的3T3*CTLL-2 T细胞 2.大鼠类BRL 肝细胞 LW-3 肝细胞BRL 3A 肝细胞
一、实验目的： 1、掌屋凋亡细胞的形态特征 2、学会用荧光探针对细胞进行双标记来检测正常活细胞、凋亡细胞和坏死细胞的方法 二、实验原理 细胞死亡根据其性质、起源及生物学意义区分为凋亡和坏死两种不同类型。凋亡普遍存在于生命界，在生物个体和生存中起着非常重要的作用。它是细胞在一定生理条件下一系列顺序发生事件的组合，是细胞遵循一定规律自己结束生命的自主控制过程。细胞凋亡具有可鉴别的形态学和生物化学特征。
一、实验目的1、掌屋凋亡细胞的形态特征 2、学会用荧光探针对细胞进行双标记来检测正常活细胞、凋亡细胞和坏死细胞的方法二、实验原理 细胞死亡根据其性质、起源及生物学意义区分为凋亡和坏死两种不同类型。凋亡普遍存在于生命界，在生物个体和生存中起着非常重要的作用。它是细胞在一定生理条件下一系列顺序发生事件的组合，是细胞遵循一定规律自己结束生命的自主控制过程。细胞凋亡具有可鉴别的形态学和生物化学特征。在形态上可见凋亡细胞与周围细胞脱离接触，细胞变园，细胞膜向内皱缩、胞浆浓缩、内质网扩张、细胞核固缩破裂呈
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