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供应商信息

威斯腾生物
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产品详情

简介: Transwell细胞迁移实验
服务名称: Transwell细胞迁移实验
提供商: 威斯腾生物技术服务中心
地区: 重庆
实验介绍
细胞迁移与侵袭实验将Transwell小室放入培养板中,小室内称上室,培养板内称下室,上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔,将研究的细胞种在上室内,由于聚碳酸酯膜有通透性,下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞,应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜,就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。
实验步骤:
1材料准备:
可拍照显微镜,Transwell小室,孔径8μm,没包被胶的(Coster和Corning公司的也较常用),Transwell迁移实验的细胞培养板24孔板。细胞培养板应当与购买的Transwell小室相配套,BD公司的Matrigel,无血清DMEM,(1%胎牛血清)DMEM和1640培养基,DMEM完全培养基,1640完全培养基(也可加到20%血清),无菌PBS,棉签,胰酶,4%多聚甲醛固定液或者甲醇,结晶紫染液(0.1%(g/ml)PBS结晶紫)
2步骤和流程
2.1基质胶铺板:
用BD公司的Matrigel 1:8(根据细胞产生mmp的量来决定)稀释,包被Transwell小室底部膜的上室面,置37℃30min使Matrigel聚合成凝胶。使用前进行基底膜水化。
2.2制备细胞悬液
①制备细胞悬液前可先让细胞撤血清饥饿12-24h,进一步去除血清的影响。但这一步并不是必须的。
②消化细胞,终止消化后离心弃去培养液,(用PBS洗1-2遍),用含BSA的无血清培养基重悬。调整细胞密度至5×105/ml。
2.3接种细胞
①取细胞悬液100µl加入Transwell小室。
②24孔板下室一般加入600µl含20%PBS的培养基,特别注意的是,下层培养液和小室间常会有气泡产生,一旦产生气泡,下层培养液的趋化作用就减弱甚至消失了,在种板的时候要特别留心,一旦出现气泡,要将小室提起,去除气泡,再将小室放进培养板。
③培养细胞:常规培养12-48h(主要依癌细胞侵袭能力而定)。24h较常见,时间点的选择除了要考虑到细胞细胞侵袭力外,处理因素对细胞数目的影响也不可忽视。
2.4结果统计
直接计数法,“贴壁”细胞计数,这里所谓的“贴壁”是指细胞穿过膜后,可以附着在膜的下室侧而不会掉到下室里面去,通过给细胞染色,可在镜下计数细胞。
取出Transwell小室,弃去孔中培养液,用无钙的PBS洗2遍,甲醇固定30分钟,将小室适当风干。
0.1%结晶紫染色20 min,用棉签轻轻擦掉上层未迁移细胞,用PBS洗3遍。
400倍显微镜下随即五个视野观察细胞,记数。
实验周期
1个月

【本平台合作项目】
分子诊断、病理诊断、药效学评价、毒理学实验、细胞药筛、动物建模、PDX模型、CRISPR/Cas9基因编辑、病理检测、基因芯片、蛋白组学、代谢组学、高通量测序、ChIP、CO-IP、生物信息学分析、知识产权服务!
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transwell技术服务transwell技术服务:一类有通透性的杯状的装置;其外形为一个可放置在孔板里的小杯子,杯子底层的一张有通透性的膜(一般为聚碳酸酯膜)。该膜微孔的大小在0.1-12.0µm之间。Transwell放入培养板后,分为两室:Transwell小室内称上室,盛装上层培养液;培养板内称下室,盛装下层培养液。上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。 transwell技术服务应用细胞种在上室内,因聚碳酸酯膜有通透性,故可研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。根据transwell的特点(孔径,膜),可进行如下方面研究:1.共培养                   孔径<3.0um研究下室细胞B代谢物(分泌物)对上室细胞A的影响。2.细胞趋化               孔径可选择5.0、8.0、12.0µm研究进入下室的细胞量,反映下室成分对上室细胞的趋化能力3.细胞迁移               孔径常选择8.0、12.0µm研究进入下室的细胞量,反应上室细胞的迁移能力4.细胞侵袭               孔径常选择8.0、12.0µm,膜上室侧铺有基质胶,研究进入下室的细胞量,反映上室细胞的侵袭能力 具体应用例子一、肿瘤细胞侵袭实验(transwell)原理:模仿体内细胞外基质,细胞只有分泌基质金属蛋白酶(MMPs),降解基质胶才可进入下室。 步骤1.  Transwell小室准备1)无基质胶Transwell小室制备A. 包被基底膜:A. Matrigel (50mg/L)按1:8稀释,无血清培养基作为稀释液B. 取适量加入Transwell小室中(24孔板transwell小室加100 ul),4℃操作。C. 37℃培养箱中,孵育4-5h(>5h);出现“白色层”时,说明已经变为固态。 2)有基质胶Transwell小室制备A. 小室放入培养板中,上室加入300µl预温的无血清培养基B. 室温下静置15-30min,使基质胶再水化C. 再吸去剩余培养液。 2.细胞悬液准备1)消化、收集细胞;2)PBS洗1-2次3)用含BSA的无血清培养基重悬(细胞密度约在1-10×105/ml)。 3. 细胞接种1)取适量细胞悬液加入Transwell小室(按tra
       上海鸿立生物技术有限公司拥有稳固的技术平台,高效的服务团队。以技术服务为核心为广大客户提供真实可靠的实验数据,细致入微的服务。可为客户提供Western Blot,免疫共沉淀Real time PCR, Elisa免疫荧光,激光共聚焦,病毒包装,MTT, Transwell 等单项实验服务,并有能力承接肿瘤,神经等方面的实验课题,帮助客户完成实验构思,操作及英文文章润笔等专项服务实验咨询专线 13817159308(24小时)实验咨询邮箱:baisong0727@163.com实验咨询QQ: 1624720515Transwell:一类有通透性的杯状的装置;其外形为一个可放置在孔板里的小杯子,杯子底层的一张有通透性的膜(一般为聚碳酸酯膜)。该膜微孔的大小在0.1-12.0µm之间。Transwell放入培养板后,分为两室:Transwell小室内称上室,盛装上层培养液;培养板内称下室,盛装下层培养液。上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。 应用细胞种在上室内,因聚碳酸酯膜有通透性,故可研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。根据transwell的特点(孔径,膜),可进行如下方面研究:1.共培养                   孔径<3.0um研究下室细胞B代谢物(分泌物)对上室细胞A的影响。2.细胞趋化               孔径可选择5.0、8.0、12.0µm研究进入下室的细胞量,反映下室成分对上室细胞的趋化能力3.细胞迁移               孔径常选择8.0、12.0µm研究进入下室的细胞量,反应上室细胞的迁移能力4.细胞侵袭               孔径常选择8.0、12.0µm,膜上室侧铺有基质胶,研究进入下室的细胞量,反映上室细胞的侵袭能力 具体应用例子一、肿瘤细胞侵袭实验(transwell)原理:模仿体内细胞外基质,细胞只有分泌基质金属蛋白酶(MMPs),降解基质胶才可进入下室。 步骤1.  Transwell小室准备1)无基质胶Transwell小室制备A. 包被基底膜:A. Matrigel (50mg/L)按1:8稀释,无血清培养基作为稀释液B. 取适量加入Transwell小室中(24孔板transwell小室加100 ul),4℃操作。C
Transwell细胞培养小室(1).共培养体系:小于3.0um孔径条件下,细胞不会迁徙通过,因此,若研究不涉及细胞运动能力,不需要细胞穿过聚碳酸酯膜,则应选择3.0?m以下孔径。常用0.4、3.0?m。将细胞A种于上室,细胞B种于下室,可以研究细胞B分泌或代谢产生的物质对细胞A的影响。Transwell细胞培养小室(2).趋化性实验可用5.0、8.0、12.0?m膜,上室细胞可穿过聚碳酸酯膜进入下室,计数进入下室的细胞量可反映下室成分对上室细胞的趋化能力。上海子起生物科技有限公司联系人:杨先生400-811-9081电话:021-58387065传真:021-58357065手机:13681619662qq:2453006496www.ziqibio.com邮编:200123上海浦东区高青路4567弄1号楼303①细胞B对细胞A的趋化作用:将细胞A种于上室,细胞B种于下室,可以研究细胞B分泌或代谢产生的物质对细胞A的趋化作用。②趋化因子对细胞的趋化作用:将细胞种于上室,下室加入某种趋化因子,可研究该趋化因子对细胞的趋化作用。Transwell细胞培养小室(3).肿瘤细胞迁移实验常用8.0、12.0?m膜,上室种肿瘤细胞,下室加入FBS或某些特定的趋化因子,肿瘤细胞会向营养成分高的下室跑,计数进入下室的细胞量可反映肿瘤细胞的迁移能力。Transwell细胞培养小室(4).肿瘤细胞侵袭实验常用8.0、12.0?m膜,原理与肿瘤细胞迁移实验类似。上室种肿瘤细胞,下室加入FBS或某些特定的趋化因子,肿瘤细胞会向营养成分高的下室跑,但与肿瘤细胞迁移实验不同的是,聚碳酸酯膜上室侧铺上一层基质胶,用以模仿体内细胞外基质,细胞欲进入下室,先要分泌基质金属蛋白酶(MMPs)将基质胶降解,方可通过聚碳酸酯膜。计数进入下室的细胞量可反映肿瘤细胞的侵袭能力。Transwell细胞培养小室货号    产品名称    产地    描述及包装3421    Transwell板( 24孔,孔径5.0um)    Corning    滤膜直径:6.5mm;滤膜孔径:5.0μm。48个/箱,12个/板,4块板/箱3422    Transwell板( 24孔,孔径8.0um)    Corning    滤膜直径:6.5mm;滤膜孔径:8.0ziqibio3422
细胞迁移/细胞侵袭/侵袭小室实验/transwell实验/细胞功能检测/细胞迁移与侵袭/细胞实验 摘要:在A549细胞中过表达human Oct-4基因,通过对Oct-4过表达细胞组、空细胞组与阴性对照组进入下室的细胞数量进行测定,研究Oct-4基因对细胞迁移能力的影响。实验结果显示Oct-4基因可以促进A549细胞的迁移能力。为进一步深入研究Oct-4基因的功能提供实验数据。 关键词:Oct-4,Transwell, A549,细胞迁移 一、实验原理Transwell小室底层的一张有通透性的膜(一般为聚碳酸酯膜),将其放置于孔板中,小室内称上室,培养板内称下室。由于聚碳酸酯膜有通透性,下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞。应用Transwell可研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。肿瘤迁移实验:研究肿瘤细胞的迁移能力或特定情况下肿瘤细胞的迁移能力。常用8.0、12.0µm膜,上室种肿瘤细胞,下室加入FBS或某些特定的趋化因子,肿瘤细胞会向营养成分高的下室跑,计数进入下室的细胞量可反映肿瘤细胞的迁移能力。肿瘤侵袭实验:研究肿瘤细胞的侵袭能力或特定情况下肿瘤细胞的侵袭能力。在聚碳酸酯膜上涂上一层基质胶,模仿细胞外基质,上室种肿瘤细胞,下室加入FBS或某些特定的趋化因子,细胞要把基质消化后才可以从上室迁移到下室,计数进入下室的细胞量测定细胞的侵袭能力。二、 实验目的用质粒Oct-4-EGFP转染后的A549细胞与正常细胞组、阴性对照组进行比较分析,考察基因Oct-4对A549细胞的迁移能力产生的影响。三、 实验步骤实验共分以下4个主要步骤:1.质粒转染细胞:准备A549细胞,转染前一天按照70-80%密度铺在6cm培养皿中。16h后,按照转染试剂说明书转染细胞(8μg质粒,20μl lipofectamine 2000转染试剂) 。2.Transwell铺板;a) 转染12h后,胰酶消化,收集细胞: 细胞计数后,每个样品准备1×106 cells/mL。b) 1,200rpm×5min 离心后,重悬浮于1mL无血清培养基。c) 湿润小室: 将300μL预热的无血清培养基加入到小室中,常温放置1~2h,将ECM膜湿润d) 将小室中的培养基去掉,24孔板中,没有小室的孔中加入500μL含10

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