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- 2026年03月28日
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康测科技
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T细胞受体（TCR）测序技术服务
T细胞受体（TCR）测序
TCR
T细胞受体（T cell receptor，TCR）是T细胞表面，负责特异性识别与MHC（主要组织相容性复合体）结合的抗原肽的蛋白。当TCR与抗原肽和MHC结合时，T淋巴细胞通过信号转导被激活，进入后续的免疫应答过程。 人类基因组中有4个TCR基因：
- 两个编码轻链TCR：TRA基因编码TCRα，TRG基因编码TCRγ；
- 两个编码重链TCR：TRB基因编码TCRβ，TRD基因编码TCRδ；
重链TCR和轻链TCR形成异源二聚体，组成完整的TCR。在人类中存在两种TCR：TCRα/β和TCRγ/δ，其中95％的T细胞表达TCRα/β，称为αβT细胞；5％的T细胞表TCRγ/δ，称为γ/δT细胞。该比例在个体发育过程中和患病状态（例如白血病）中发生变化，物种之间也有所不同。
成熟的重链TCR基因由可变区（V）、多变区（D）、连接区（J）和恒定区（C）四部分基因片段组成（VDJC），轻链TCR则缺少D区（VJC）。重链和轻链TCR都具有3个互补决定区（complementarities determining region, CDR），在抗原识别中起主要作用：
- CDR1和CDR2相对保守，负责识别MHC；
- CDR3是负责识别抗原的主要CDR；
TCR基因是人类基因组中复杂度最高的基因，也是变异程度最高的基因。人外周血中大概含有2x1016~1018种表达不同的TCR的T细胞。这个复杂度主要源自3个因素：
- 组成的多样性：成熟TCR的VDJC/VJC结构，是通过复杂的重组生成的。基因组中有65~100种V基因片段、2种D基因片段和13种J基因片段，TCR重组时需要从上述三种片段中各选一个，这赋予了TCR高度的多样性；
- 连接的机动性：在重排的过程中，在V-D及D-J的连接区经常有非模板的核苷酸的随机插入或删除，进一步增加了CDR3区的多样性；
- 体细胞突变：T细胞D区的突变频率约为正常的1000倍；
TCR-seq常用于评价各种免疫相关疾病和遗传性突变引起的某个物种所有T细胞或特定T细胞激活介导的细胞免疫反应中TCR基因重排碱基序列，以及各序列的丰度，用于研究不同T细胞克隆的转录情况和相互间关系，从而揭示更深层次的T细胞功能特异性，继而解释免疫应答机制、免疫耐受原因，免疫调节形式等相关生命现象。
TCR-seq
TCR-seq是为检测TCR多样性发展出来的测序技术，目前有两大主流技术：多重PCR和5' RACE。两种技术的原理如下图所示，技术优劣势如下表所示：
上述两种技术都有两个共同的问题：PCR重复引入的定量准确性问题和PCR/测序扩增引入的假阳性TCR问题。
- 不同TCR之间扩增效率无法一致，因此不同TCR扩增时会不同程度的引入重复TCR分子，给定量带来问题；
- TCR复杂度高，不同TCR之间可能只有少数碱基差异；PCR/测序过程中引入碱基错误，在没有纠错机制的情况下，会被当成新的TCR处理，造成假阳性；
康测方案
为解决上述TCR-seq中的技术问题，康测开发出“绝对定量TCR-seq”测序技术，其原理为在扩增偏好性更低的5' RACE技术基础上，引入我公司UMI/UID数字标签纠错技术，其原理如下图所示：
技术优势：
- 多物种：我们可针对不同物种，开发TCR-seq检测技术；
- 完整TCR检测：该技术使用5’RACE技术原理，可以获得TCR的完整序列，全面研究CDR1/2对MHC的亲和力影响；
- PCR偏好性低：该技术使用5’RACE技术原理，相较于mPCR具有更低的偏好性；
- 定量准确：通过引入UMI数字标签，进一步去除PCR扩增重复和测序重复、彻底排除重复引入的定量问题，准确还原TCR克隆的丰度；
- 无假阳性：通过引入UMI数字标签，多序列比对校正PCR和测序错误，去除假阳性TCR；
服务流程
您只需要：
- 确定检测的TCR链；
- 提供足量的T细胞、组织或全血；
- 我们将完成RNA提取、建库、测序和分析的全部工作；
实测结果
UMI/UID去重后，TCR reads由900万降低到200万，去除了600万由于PCR过度扩增引入的重复Reads；
UMI/UID纠错后，TCR 种类由99万降低到63万，去除了1/3的假阳性克隆
UMI/UID去重、纠错前后，TCR复杂度、种类、含量的变化
UMI/UID去重、纠错前后，对两个重复样本的检测，罕见克隆鉴定灵敏度从千分之一提高到万分之一
经测试，我们的TCR-seq检测到的TCR含量可以在10-1 ~ 10-4范围内保持线性
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文献和实验免疫组库是哪位？ 能够称为“组库”，首先是功能相似的N多细胞的集合。而“免疫”是指免疫细胞，特指 T/B 淋巴细胞。“So~免疫组库”（Immune Repertoire，IR），指某个体，特定时间点下，所有功能多样性T/B淋巴细胞的总和。T/B细胞利用细胞表面受体（TCR/BCR）识别和结合抗原，介导机体产生针对性的免疫应答，发挥免疫功能并做好记录备案，如果该抗原再次入侵可迅速作出反应，作为健康卫士守护肌体城池。 “组库”从哪来？ 除了 n 多 T/B 细胞的集合，TCR/BCR
免疫组库是哪位？ 能够称为“组库”，首先是功能相似的N多细胞的集合。而“免疫”是指免疫细胞，特指T/B淋巴细胞。“So~免疫组库”（Immune Repertoire，IR），指某个体，特定时间点下，所有功能多样性T/B淋巴细胞的总和。T/B细胞利用细胞表面受体（TCR/BCR）识别和结合抗原，介导机体产生针对性的免疫应答，发挥免疫功能并做好记录备案，如果该抗原再次入侵可迅速作出反应，作为健康卫士守护肌体城池。 “组库”从哪来？ 除了n多T/B细胞的集合，TCR/BCR多样
-J的连接区经常有非模板的核苷酸的随机插入或删除，进一步增加了CDR3区的多样性(连接形成的多样性约为2 × 1011)。这种基因片段连接的不准确性使TCR的表达呈多样性, 以识别各种不同的抗原。正常个体在无抗原刺激时，TCR基因重排是随机的，因此正常人外周T细胞呈多家族、多克隆性特点。不同抗原(肿瘤、疫苗、病院微生物或者移植物等)刺激后，TCR V区基因可对该\抗原产生特异性识别，并使带有这类基因的 T细胞得到优势扩增，可用于分析不同 TCR V亚家族 T细胞的表达和利用。 T细胞受体测序
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