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- 2026年03月04日
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吉凯基因
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Cas9文库测序，单细胞Cas9文库测序
利用CRISPR-Cas9技术建立与某类功能相关的突变体亚库或者全基因组的突变体库，利用慢病毒载体大规模导入构建好的sgRNA亚库或者全库，能够同时靶向成百上千个基因，实现高通量的功能基因筛选。
吉凯基因的特色CRISPR自平衡文库（吉凯专利）一个样品就可以达到文库碱基平衡（一般建库方法需要多样品混样达到碱基平衡），确保不浪费数据，一个样品有两个子文库，构成一对内置的技术重复，两者的一致性可以用来监控文库制备过程中的不稳定性（PCR扩增碱基偏好性），会提供各样本子文库PCC一致性图展示文库质量。通过数据质检分析获得差异功能基因。
2.单细胞CRISPR文库筛选测序
单细胞CRISPR文库技术通过将CRISPR文库与单细胞测序技术结合，可实现同时检测多个不同细胞基因敲除/激活造成的基因转录本变化情况，通过逐个细胞地将CRISPR扰动和单细胞基因表达数据直接相关联，可以在不了解细胞类型或标记物的前提下，分析数百种不同的CRISPR扰动，并检测数百至数万个细胞中具有直接基因表达表型的单个向导RNA(sgRNA)。
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文献和实验成 cDNA 后，我们对获得的 cDNA 序列进行扩增，对转录组文库构建方式同单细胞测序实验，免疫组富集文库则需额外设计 2 次引物 binding 到 C 区，对 TCR/BCR 序列进行富集，后期对富集 cDNA 随机打断，获得不同长度的打断产物，再经 PCR 扩增后，形成免疫组文库用于上机测序。 ps:由于引物设计问题，免疫组库测序现只适用于人鼠模型的研究哦~
原理： 将染色质和与之相互作用的转录因子和组蛋白通过甲醛等物质交联起来，然后通过超声将染色质打碎成小片段，加入针对特定转录因子或特殊修饰的组蛋白抗体，通过 Protein A/Protein G 微球或磁珠将抗体-转录因子-染色质复合物拖下来，通过 PCR 或测序的方法检测与目的蛋白相结合的 DNA 序列，进而研究这些转录因子在细胞发育或者生长中的作用位点。 ✦ ChIP-seq： ChIP-seq 将 ChIP 技术与二代测序相结合，将 ChIP 下来的 DNA 进行二代测序文库构建，能够获取
干货 | CUT and Tag 让 ChIP-Seq更简单高效！
&Tag 技术的实验流程简单，可一步实现 DNA 的片段化和接头连接，仅需 9h 即可实现从细胞到二代测序文库的转化。 实验流程主要包括：①收集细胞；②分别孵育一抗和二抗；③孵育 pA/pG-Tn5 转座子（Hyperactive pA/pG-Tn5 Transposon）；④激活转座子，进行 DNA 片段化；⑤DNA 提取；⑥文库扩增与纯化。 1. 细胞起始量低 投入不同起始量的 HEK293 细胞（ 100 或 10,000 个细胞），按照 Vazyme #TD901
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