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抗体组库/免疫组库测序
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泓迅科技
人体淋巴细胞主要包括T细胞、B细胞。B细胞约占外周淋巴细胞总数的20%,其主要功能是产生抗体介导体液免疫应答。B细胞抗原受体((B cell receptor, BCR)是B细胞识别抗原的一种膜表面免疫球蛋白(SmIg),具有抗原结合特异性。BCR由两条重链和两条轻链连接而成,其中重链分为可变区(V区)、恒定区(C区)、跨膜区及胞质区;轻链则只有V区和C区。V区由VH和VL两个结构域组成,它们各由三个互补决定区(CDR1、CDR2和CDR3)组成,CDR的氨基酸组成和排列顺序呈现高度多样性,在同一个体内,可高达109~1012,构成容量巨大的BCR库,赋予个体识别各种抗原、产生特异性抗体的巨大潜能,这三个CDR均参与对抗原的识别,共同决定BCR的抗原特异性。
T细胞主要功能是介导细胞免疫。T细胞抗原受体(T cell receptor,TCR)是T细胞特异性识别和结合抗原肽-MHC分子的分子结构,大多数TCR由α和β肽链组成,少数T细胞的TCR由γ和δ肽链组成。每条肽链又可分为可变区(V区),恒定区(C区),跨膜区和胞质区等几部分,而α和β两条肽链的V区(Vα、Vβ)又各有三个高变区CDR1、CDR2、CDR3,其中以CDR3变异最大,直接决定了TCR的抗原结合特异性。TCR的CDR3由V、D、J三个基因编码,在淋巴细胞的成熟过程中,通过V、D、J基因的重排形成了各种重组序列片段,再加上DNA碱基的SNP、Indel突变形成了T细胞的多样性。
免疫组库测序(Immuno-Seq)是以 T/B 淋巴细胞为研究目标,以5’RACE技术扩增决定B细胞受体(BCR)或T细胞受体(TCR)多样性的互补决定区(CDR区),结合高通量测序技术,全面评估免疫系统的多样性。Immuno-Seq技术可以观察和分析T细胞和B细胞,具有较高的测序深度和特异性。在疾病监控,抗体生产,疫苗研究,健康体检等领域有广泛的应用。
抗体组库服务优势
- 采用RACE技术和专门优化的PCR扩增体系与程序,降低免疫组库中基因扩增偏向性
- 多样化的NGS分析平台
- 极高的成功率与快速交付速度
- 完备的生物信息学分析,深度挖掘高价值信息
抗体组库应用方向
- 免疫组库或抗体组库多样性分析表征健康状况
- 示踪抗原特异性抗体发育过程,开发人源化抗体
- 评价疫苗保护性能
抗体组库服务内容
| 客户提供 | 交付内容 | 发货周期 | 价格 |
|---|---|---|---|
| 1-2 ml血液或提取的高质量RNA | <1. NGS测序数据 2. 生物信息学数据分析结果 |
6-8周 | 咨询 |
泓迅经典案例:免疫组库测序及生信分析
泓迅科技对RNA提取后经5’RACE反转录并扩增建库。
文库构建完成后,我们使用 Qubit2.0 Fluorometer 进行初步定量,稀释文库后使用 Agilent 2100 bioanalyzer 对文库进行insert size检测。符合预期后,利用Q-PCR对文库有效浓度进行准确定量(文库有效浓度高于2nM),以确保文库质量。
检测合格后将不同文库按照有效浓度及目标下机数据量的需求,混样后进行 Illumina Miseq/HiSeq 测序。在flow cell 中加入四种荧光标记的 dNTP、DNA 聚合酶以及接头引物进行扩增;在每一个测序簇延伸互补链时,捕获新加入每一个dNTP后就释放出来的对应荧光信号,并通过专业软件将光信号转化为测序峰,从而获得待测片段的序列信息。
测序数据的质量评估
| • Per base sequence quality | • Per Sequence Quality Scores |
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| • Per Base Sequence Content | • Per Base GC Content |
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| • Per Sequence GC Content | • Per Base N Content |
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| • Sequence Length Distributionreads | • Duplicate Sequences |
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文献和实验免疫组库是哪位? 能够称为“组库”,首先是功能相似的N多细胞的集合。而“免疫”是指免疫细胞,特指 T/B 淋巴细胞。“So~免疫组库”(Immune Repertoire,IR),指某个体,特定时间点下,所有功能多样性T/B淋巴细胞的总和。T/B细胞利用细胞表面受体(TCR/BCR)识别和结合抗原,介导机体产生针对性的免疫应答,发挥免疫功能并做好记录备案,如果该抗原再次入侵可迅速作出反应,作为健康卫士守护肌体城池。 “组库”从哪来? 除了 n 多 T/B 细胞的集合,TCR/BCR
免疫组库是哪位? 能够称为“组库”,首先是功能相似的N多细胞的集合。而“免疫”是指免疫细胞,特指T/B淋巴细胞。“So~免疫组库”(Immune Repertoire,IR),指某个体,特定时间点下,所有功能多样性T/B淋巴细胞的总和。T/B细胞利用细胞表面受体(TCR/BCR)识别和结合抗原,介导机体产生针对性的免疫应答,发挥免疫功能并做好记录备案,如果该抗原再次入侵可迅速作出反应,作为健康卫士守护肌体城池。 “组库”从哪来? 除了n多T/B细胞的集合,TCR/BCR多样
球蛋白库以微调与抗原的相互作用。免疫系统在自身免疫疾病、传染病、癌症等多种疾病中扮演者至关重要的角色,也正因此免疫组库测序一直是多方领域的研究重点,即以 T/B 淋巴细胞为研究目标,对其产生的多样化免疫分子例如膜型免疫分子 BCR 和 TCR、分泌型免疫分子抗体等进行测序研究。新技术 10x 单细胞 V(D)J 的优势传统免疫组库测序利用的是多重 PCR 或 5’RACE 方法,但都存在一定的局限性,如多重 PCR 法扩增范围局限在 CDR3 区、5'RACE 法只能获得单链全长信息等。10
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