PCR Mix(含染料)(滴瓶装)价格

特别提示：包括PCR Mix(含染料)(滴瓶装)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：PCR Mix(含染料)(滴瓶装)
英文名称：PCR Mix(With Dye)
产品货号：WE0100
产品规格：5ml

  本产品以滴瓶包装，集成了PCR反应所需各要素及稳定剂、增强剂，对PCR反应中各成份的浓度有较高的宽容度，无需加样工具，将本产品直接滴入加有模板、引物的PCR管即可完成反应准备。本产品热稳定性高，启封后置2～8℃保存，六个月内可随时取用。本产品使用高度封闭的热启动DNA聚合酶，可有效减少非特异PCR产物扩增，配制PCR反应体系可在室温进行，但须注意热循环程序的第一步必须包括至少10分钟的95℃热启动。本产品已加入染料(蓝色)，反应结束后可直接进行电泳检测。扩增得到的大部分PCR产物3"端附有一个“A”碱基，因此可直接用于T/A克隆。

质量控制：
1、经检验无外源核酸酶活性；
2、PCR方法检测无宿主残余DNA；
3、能有效地扩增多种基因组中的单拷贝基因；2～8℃存放六个月，活性无明显改变。

使用方法：
  本产品以滴瓶包装，使用时，取掉旋盖后将滴瓶倒置，滴塞口对准已加入适量模板和引物的PCR管口上方，以食指和拇指轻轻挤压滴瓶，滴入一滴反应液，即可完成PCR反应准备。正常挤压时，液滴平均体积约为25μl，可能会因挤压滴瓶用力不一，造成挤出液滴体积存在差异，但对多数PCR反应，均可获得良好扩增。

1、PCR反应体系：
 

试剂	反应体积
PCR Mix	1 滴
Forward Primer，10μM	1μl
Reverse Primer，10μM	1μl
Template DNA	≤4μl

注意：
1)引物浓度以10μM作为参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。
2)PCR模板的使用量应视DNA性质加以调整。一般而言，在每滴PCR反应中，当模板为质粒DNA时，以1 pg至10ng为宜；当模板为细菌基因组DNA时，以1ng至100ng为宜；当模板为真核生物基因组DNA时，以10ng至300ng为宜。需注意，PCR模板绝非越多越好。过多的模板会对PCR反应产生抑制作用，且容易增高其它抑制物水平，影响扩增效果。

2、PCR反应条件：
 

步骤	温度	时间	循环数
预变性	95℃	10 min
变性	94℃	30 s	30-40个循环
退火	55-65℃	30 s
延伸	72℃	60 s
终延伸	72℃	5 min

注意：
1)产品含有高度封闭热启动DNA聚合酶，须在预变性95℃，10 min条件下实现酶的活化。
2)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。
3)延伸时间应根据所扩增片段大小设定，本产品的扩增效率为1 kb/min。
4)可根据扩增产物下游应用设定循环数。如循环次数太少，扩增量不足；如循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。

储存条件：-20℃，有效期2年

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