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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
544
- 英文名:
PCR Mix(With Dye)
- 保质期:
2年
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
-20℃
特别提示:包括PCR Mix(含染料)(滴瓶装)在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:PCR Mix(含染料)(滴瓶装)
英文名称:PCR Mix(With Dye)
产品规格:5ml
本产品以滴瓶包装,集成了PCR反应所需各要素及稳定剂、增强剂,对PCR反应中各成份的浓度有较高的宽容度,无需加样工具,将本产品直接滴入加有模板、引物的PCR管即可完成反应准备。本产品热稳定性高,启封后置2~8℃保存,六个月内可随时取用。本产品使用高度封闭的热启动DNA聚合酶,可有效减少非特异PCR产物扩增,配制PCR反应体系可在室温进行,但须注意热循环程序的第一步必须包括至少10分钟的95℃热启动。本产品已加入染料(蓝色),反应结束后可直接进行电泳检测。扩增得到的大部分PCR产物3"端附有一个“A”碱基,因此可直接用于T/A克隆。
质量控制:
1、经检验无外源核酸酶活性;
2、PCR方法检测无宿主残余DNA;
3、能有效地扩增多种基因组中的单拷贝基因;2~8℃存放六个月,活性无明显改变。
使用方法:
本产品以滴瓶包装,使用时,取掉旋盖后将滴瓶倒置,滴塞口对准已加入适量模板和引物的PCR管口上方,以食指和拇指轻轻挤压滴瓶,滴入一滴反应液,即可完成PCR反应准备。正常挤压时,液滴平均体积约为25μl,可能会因挤压滴瓶用力不一,造成挤出液滴体积存在差异,但对多数PCR反应,均可获得良好扩增。
1、PCR反应体系:
| 试剂 | 反应体积 |
| PCR Mix | 1 滴 |
| Forward Primer,10μM | 1μl |
| Reverse Primer,10μM | 1μl |
| Template DNA | ≤4μl |
注意:
1)引物浓度以10μM作为参考。扩增效率不高的情况下,可提高引物的浓度;发生非特异性反应时,可降低引物浓度,由此优化反应体系。
2)PCR模板的使用量应视DNA性质加以调整。一般而言,在每滴PCR反应中,当模板为质粒DNA时,以1 pg至10ng为宜;当模板为细菌基因组DNA时,以1ng至100ng为宜;当模板为真核生物基因组DNA时,以10ng至300ng为宜。需注意,PCR模板绝非越多越好。过多的模板会对PCR反应产生抑制作用,且容易增高其它抑制物水平,影响扩增效果。
2、PCR反应条件:
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 95℃ | 10 min | |
| 变性 | 94℃ | 30 s | 30-40个循环 |
| 退火 | 55-65℃ | 30 s | |
| 延伸 | 72℃ | 60 s | |
| 终延伸 | 72℃ | 5 min |
注意:
1)产品含有高度封闭热启动DNA聚合酶,须在预变性95℃,10 min条件下实现酶的活化。
2)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃,无法得到理想的扩增效率时,适当降低退火温度;发生非特异性反应时,提高退火温度,由此优化反应条件。
3)延伸时间应根据所扩增片段大小设定,本产品的扩增效率为1 kb/min。
4)可根据扩增产物下游应用设定循环数。如循环次数太少,扩增量不足;如循环次数太多,错配机率会增加,非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。
储存条件:-20℃,有效期2年
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