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- 详细信息
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716
- 英文名:
Taq Plus DNA Polymerase
- 保质期:
长期
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
北京百奥莱博专业生产销*(代"售")改进型DNA聚合酶哪里卖,我公司供应的分子生物学试剂品类齐全,且具有优势价格,欢迎新老客户垂询订购。
名称:改进型DNA聚合酶哪里卖
规格:250U
产地:国产|进口
品牌:百奥莱博
编号:SY0027
Taq Plus DNA Polymerase是Taq DNA Polymerase与一种含有3’ →5’外切酶活性 (校对活性)的蛋白组成的混合酶。其保真性是Taq DNA Polymerase的5倍,且具有更强的扩增性能。一般情况下,使用Taq Plus DNA Polymerase可以得到更高的扩增产量。有些Taq DNA Polymerase不能扩增的片段,Taq Plus DNA Polymerase可以正常扩增。PCR产物的3’端带A,可克隆至T载体。产品中提供的PCR Enhancer可有助于高GC含量片段的扩增。
产品组分:
10×Taq Plus Buffer (with 15 mM MgCl2):5×1mL
25 mM MgCl2:1 mL
dNTP Mix (10 mM each):200 μl
Taq Plus DNA Polymerase (5 U/μl):50 μl
5×PCR Enhancer:500 μl
10×Loading buffer:1.25 ml
活性定义:用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物,74℃ 30分钟内,摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位(U)。
质量控制:
核酸外切酶残留检测:10 U的本酶和0.6 μg λ-Hind III在74℃下孵育1小时,DNA的电泳谱带不发生变化。
核酸内切酶残留检测:10 U的本酶和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在74℃下孵育1小时,DNA的电泳谱带不发生变化。
大肠杆菌残留DNA残留检测:50 μl体系中,加入2 U本酶,以ddH2O为模板,扩增E. coli 16 s rDNA基因。35个循环后进行1%琼脂糖凝胶电泳,EB染色,无扩增条带。
功能检测:50 μl PCR体系中加入1.25 U本酶,以20 ng人基因组DNA为模板扩增α-1-antitrypsin gene。30个循环后将1/10PCR产物进行1 %琼脂糖凝胶电泳,EB染色,可见有单一的1 kb条带。
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·His标签蛋白纯化预装柱
编号:SY0394
英文名称:Ni-NTA 6FF Chromatography Column, 5ML
规格:5ml|1ml
Ni-NTA Agarose Resin 6FF以高度交联的6%琼脂糖凝胶为基质,通过化学方法偶联四配位的氮川三乙酸(NTA)为配体,螯合镍离子(Ni2+)后,形成非常稳定的八面体结构,镍离子处于八面体的中心,这样的结构可保护镍离子免受小分子的进攻,更加稳定,可以耐受一定浓度的还原剂、变性剂或耦合剂等苛刻条件。此外,因其基质的耐压性(该基质可以耐受最高0.3 MPa的压力),该产品可以用于工业大规模蛋白的纯化,可在相对较高的流速下,实现对目的蛋白的纯化。
Ni-NTA 6FF Chromatography Column是一种以Ni-NTA Agarose Resin 6FF为填料的中压预装柱,该预装柱具有标准接口,可以适配商品化的各类中压色谱系统,如ÄKTA等,方便客户用于纯化His-tag蛋白。
基质(Matrix):高度交联的6%琼脂糖凝胶
孔径(Bead size):45-165µm
载量(Capacity):>40mg 6×His-tagged protein/ml 基质
耐压(Tolerance Pressuremax):0.3MPa, 3bar
储存缓冲液:含20%乙醇的1×PBS
柱子尺寸(Column Size):0.7×2.5cm(1ml)
储存条件:4℃保存,有效期2年
注意事项
1)建议纯化所用缓冲液和蛋白溶液经0.22µm或0.45µm滤膜过滤后上柱使用。
2)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用方法
(一)纯化流程
1 缓冲液的准备
缓冲液使用原理:低咪唑上样,高咪唑洗脱,或者高pH上样,低pH洗脱。Buffer 在使用前最好用0.22µm或0.45µm滤膜过滤除菌。可溶性组*酸标签蛋白纯化所需配方详见附表1。包涵体组*酸标签蛋白纯化所需缓冲液及配方详见附表2。
2 样品准备
2.1 细菌表达的蛋白(本说明以细菌表达蛋白为例)
1)挑取单菌落到含有适合抗性的LB培养基中,根据载体说明加入相应的诱导剂诱导相应的时间。
2)表达结束后,将培养液转至离心瓶,7000rpm,离心15min,收集菌体,然后加入1/10体积的裂解液(Lysis buffer)和PMSF(PMSF在破碎前加入,其终浓度为1mM),同时也可加入其他蛋白酶抑制剂,但不能影响目的蛋白与树脂的结合。
3)之后加入溶菌酶,使其工作浓度为1mg/ml。【注】:如果表达的宿主细胞内含pLysS或pLysE,可以不加入溶菌酶。
4)将菌体沉淀悬浮起来(如果菌液浓度高,可考虑加入10µg/ml RNase A和5µg/ml DNase I),混匀,置于冰上超声破碎细胞,至菌液基本保持澄清。
5)收集上述澄清蛋白液,10000rpm,4℃离心20-30min。取上清,0.22µm/0.45µm滤膜过滤后,置于冰上备用或-20℃保存。
2.2 酵母、昆虫和哺乳细胞分泌表达的可溶性蛋白
将细胞培养液转移至离心瓶,5000rpm离心10min,收集上清。如上清中不含EDTA、组*酸和还原剂等,即可直接上柱纯化;如含有EDTA、组*酸和还原剂等物质,则需用1×PBS 4℃下透析后方可上柱。
【注】:对于大量体积的上清,需加入硫*(代"酸")铵进行沉淀浓缩,之后经1×PBS 4℃下透析后上柱。
2.3 包涵体蛋白纯化(以细菌为例)
1)将培养液转移至离心瓶,7000rpm,离心15min,收集菌体去上清。
2)按照菌体:裂解液=1:10(w/v)的比例将菌体充分悬浮,混匀,冰浴超声破碎。
3)将破碎液转移至离心管,10000rpm,4℃离心20-30min,去上清。可重复步骤2)和3)一次。
4)按照菌体:裂解液(含8M尿素)=1:10(w/v)的比例将包涵体充分悬浮。
5)变性条件下纯化His标签蛋白纯化。
3 样品纯化(以AKTA使用为例)
1)将泵管道注满去离子水。去掉产品上塞,连接至色谱系统中,再折断下口,将预装柱连接到色谱系统中,注意旋紧。
2)3-5倍柱体积去离子水冲洗出存储缓冲液。
3)至少5倍柱体积的Lysis Buffer 平衡色谱柱。推荐流速为5ml/min。
4)利用泵或注射器上样。【注】:若样品粘度增加,即使上样体积很少也会导致层析柱很大的反压;上样量不要超过柱子的结合能力;大量的样品体积也可能造成很大的反压,使得进样器更难使用。
5)Wash Buffer 平衡柱子,直到紫外吸收达到一个稳定的基线(一般至少10-15个柱体积)。【注】:在样品和结合缓冲液中加入低浓度咪唑可以提高样品纯度。
6)Elution Buffer一步法或梯度法进行洗脱。一步法洗脱中一般5倍柱体积洗脱液即可。梯度洗脱可以用一个小的梯度,例如20倍柱体积或更多来分离不同结合强度的蛋白质。
7)建议用更高浓度咪唑(如500mM)彻底清洗纯化柱上结合的杂蛋白。随后依次用3倍柱体积的Lysis Buffer和5倍柱体积的去离子水清洗树脂。5倍柱体积的20%乙醇平衡树脂,最后将树脂保存在20%乙醇的1×PBS中,置于4℃保存。
4 SDS-PAGE检测
将纯化过程中得到的样品(包括原始样品、流出组分、洗杂及洗脱组分等)利用SDS-PAGE进行检测,判定其纯化效果。
(二)在位清洗
当填料使用过程中发现反压过高(>0.5Mpa)或者填料上面出现明显的污染时,需对其进行在位清洗(Cleaning-in-Place,CIP)。在位清洗时,先把Ni2+脱掉,清洗结束后,将填料保存在20%乙醇中,后者重新挂Ni后再保存在20%乙醇中。建议按照下面操作去除填料上残留的污染物,如沉淀蛋白、疏水蛋白和脂蛋白等。
1 去除强疏水结合的蛋白,脂蛋白和脂类
使用30%异丙醇清洗5-10个柱体积,接触时间为15-20min可以去除此类污染物。之后再用去离子水清洗10倍柱体积。也可以选择使用含有去污剂的酸性或者碱性溶液清洗填料2倍柱体积。例如含有0.1-0.5%非离子去污剂的0.1M醋酸溶液,接触时间为1-2h。去污剂处理后,需用70%的乙醇清洗5倍柱体积,彻底去除去污剂。最后利用去离子水清洗10倍柱体积。
2 去除离子作用结合的蛋白
使用1.5M NaCl 溶液接触10-15min,之后用去离子水清洗10倍柱体积。
(三)填料再生
当填料使用过程中发现反压过高(>0.5Mpa),填料上面出现明显的污染,或填料载量明显变低时,需要对其进行镍离子剥离及重新挂镍处理,即填料再生。按照下面操作流程进行:
1)使用0.2M 醋酸溶液(含6M GuHCl)清洗2倍柱体积;
2)去离子水清洗5倍柱体积;
3)2%SDS清洗3倍柱体积;
4)去离子水清洗5倍柱体积;
5)乙醇清洗5倍柱体积;
6)去离子水清洗5倍柱体积;
7)100mM EDTA(pH 8.0)清洗5倍柱体积;
8)去离子水清洗5倍柱体积;
9)100mM NiSO4清洗5倍柱体积;
10)去离子水清洗10倍柱体积。
填料再生后,可立即使用,也可保存在20%乙醇中,置于4℃备用。
改进型DNA聚合酶哪里卖关键词:Taq Plus DNA Polymerase,改进型DNA聚合酶,SY0027
·Alexa Fluor 488标记驴抗山羊IgG(H+L)
编号:SY0732
英文名称:Alexa Fluor 488 AffiniPure Donkey anti-Goat IgG (H+L)
规格:100μl
本品是由Alexa Fluor 488标记的驴抗山羊IgG(H+L),使用抗原偶联的琼脂糖微珠从驴抗血清内亲和色谱纯化所得。免疫电泳和/或ELISA法检测显示本品特异性结合完整的山羊IgG分子,也会与其他山羊免疫球蛋白的轻链结合。本品预先与相近物种包括鸡、豚鼠、叙利亚仓鼠、马、人、小鼠、兔和大鼠血清蛋白经过亲和吸附处理,ELISA和/或固相免疫吸附检测证实本品与以上物种几乎无交叉反应。但可能会与其他物种免疫球蛋白发生交叉反应。本品不会识别非免疫球蛋白类的血清蛋白。
Alexa Fluor 488的光谱性质同FITC,Amax(最大激发波长)为493nm,Emax(最大发射波长)为519nm。本品适合做多标实验,广泛应用于多种免疫学实验如免疫细胞化学(ICC),流式细胞术(FC)以及免疫组化(IHC)等。
浓度:0.65 mg/ml
缓冲液:0.005M 磷酸*,0.125M *化*, pH 7.6
稳定剂:7.5mg/ml BSA(无IgG,蛋白酶),50% 甘油
防腐剂:0.025% 叠氮化*
推荐稀释比例:1:50~400(适合多数实验)
储存条件:-20℃,避免反复冻融,有效期一年。
·冰冻动植物组织RNA稳定-过渡溶液
编号:SY0268
英文名称:ICE Tissue Stabilizer
规格:100ml
本品是一种新型的冰冻组织过渡溶液,可以帮助解冻冰冻组织,同时保护RNA完整性,从而可以使冰冻组织转变到普通的匀浆方法易于处理的状态,以提取高质量的RNA。处理后的冰冻组织不需要在匀浆前将其碾磨成粉,甚至在匀浆前可以进一步对组织进行切割。加入RNAKeeper-ICE溶液后,组织从坚硬的冰冻状态转变为柔软状态,此时该溶液渗入组织,使RNA酶失活。用本品溶液处理后,组织可以在室温下操作而不用担心RNA会发生降解。而且,样品能被安全的称重,进一步切割,或者进行多种实验而不影响RNA的质量。处理后的组织样品可以直接加入到裂解溶液中破碎,也可以置于-20℃长期保存。
本产品适用于动物组织以及培养细胞、白细胞。经测试,可用于肝、肾、脾、肺、心、胸腺、胰等组织的保存。
本产品与基于异硫*酸胍的RNA提取试剂如Total RNA Extraction Reagent, Trizol,或基于离心柱的RNA提取试剂盒兼容。
应用实例
1. 将本品在-70℃或-80℃预冷。
2. 样品保存:
A.动物组织:按100 mg组织比不小于1 ml 本品的比例,将冰冻组织浸没于预冷的本品中。注意:组织块的厚度应不超过0.5 cm,否则会影响本品的渗透效率,导致RNA稳定效果变差。
B.培养细胞、白细胞:收集细胞,用PBS清洗后加入至少10倍体积本品,盖紧管盖,上下颠倒数次。此时沉淀是否被完全悬浮对实验无影响。
3. 将浸没于本品的组织转移至-20℃存放。至少16小时后,组织即可匀浆进入后续提取过程;若不立即匀浆,组织可继续在-20℃稳定存放6个月。这个过程中,组织可从溶液中取出,在室温进行切割、称重等操作(注意在室温暴露的时间不要超过30分钟)后继续浸没在本品中保存。
4. RNA提取:将组织取出,用镊子轻轻挤掉多余的本品溶液,置于裂解液中,立刻匀浆。如果是细胞样品,10000g,4℃离心1分钟,弃上清,加入裂解液。
改进型DNA聚合酶哪里卖关键词:Taq Plus DNA Polymerase,改进型DNA聚合酶,SY0027
BTN130896 YPG液体培养基 YPG Liquid Medium
HC0034 Transwll 聚碳酸酯膜嵌套0.4um
乙酸*溶液(3mol/L,pH7.0,RNase free) 500ml
ARB10040 人I型胶原交联羧基末端肽(ICTP)Elisa分析 Human cross-linked carboxy-terminal teloPeptide of type i collagen,ictp ELISA KIT
6106-21-4 Succinic acid Sidium 琥珀酸*
BTN131036 DNA 5’末端标记试剂盒 DNA 5’ End-Labeling Kit
PY01-185 荧光素 ind 25克
133-32-4 Indole-3-butyricacid(IBA)吲哚-3-丁酸(水溶)
BL0863 羊抗人IgA免疫血清
酰基辅酶A合成酶 Sodium oxamate 9013-18-7
羧苄青霉素溶液(50mg/ml) Carbenicillin 50mg/ml 10ml
ARB13158 小鼠结合珠蛋白/触珠蛋白(Hpt/HP)ELISA代测服务 Mouse haptoglobin,hpt/hp ELISA KIT
ARB14082 犬核因子Kb(NFKb)Elisa定量检测
β-葡聚糖酶 Span 40 9025-70-1
BL1068 麦芽汁琼脂
PY02-322 Skirrw琼脂 250克
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文献和实验xjktony扩增模板的GC 含量为66%,也不算很高,我做过更高的GC 含量(80%)的PCR.对于 这种高GC含量的PCR,要加些DMSO等,以解除其二级结构的影响,当然现在也有专门这种PCR Buffer卖.vanny宝生物有这种做高GC含量的酶和buffer,称为LA TAKARA酶,里面有GC buffer,效果还不错。westernblot你用DMSO5%加到里面,60%应该不是算高的,如果实在不行,就用advantage 2 high GC taq polymeras
xjktony 扩增模板的GC 含量为66%,也不算很高,我做过更高的GC 含量(80%)的PCR.对于这种高GC含量的PCR,要加些DMSO等,以解除其二级结构的影响,当然现在也有专门这种PCR Buffer卖. vanny 宝生物有这种做高GC含量的酶和buffer,称为LA TAKARA酶,里面有GC buffer,效果还不错。 westernblot 你用DMSO5%加到里面,60%应该不是算高的,如果实在不行,就用advantage 2 high GC
放到“精华”帖子中,以期能进一步深入讨论。请大家积极发言,谈谈自己的体会。聚合酶链式反应(polymerase chain reaction ,PCR)是一种利用耐热的DNA聚合酶在体外扩增DNA的方法,为最常用的分子生物学技术之一。典型的PCR由(1)高温变性模板;(2)引物与模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反应组成一个循环,通过多次循环反应,使目的DNA得以迅速扩增。当DNA长度小于2kb时,一般PCR反应都问题不大,均较容易得到希望的条带;但当DNA长度较长时,PCR就比较困难
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