相关产品推荐更多 >
万千商家帮你免费找货
0 人在求购买到急需产品
- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
310
- 英文名:
dT Tailing Kit
- 保质期:
一年
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
低温运输,-20℃
- 规格:
50次
特别提示:包括平末端DNA加T试剂盒在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:平末端DNA加T试剂盒
英文名称:dT Tailing Kit
产品货号:BTN60106
产品规格:50次
本产品利用Taq DNA polymerase的不依赖于模板的末端转移酶活性,在只有dTTP存在的情况下,在平末端的DNA片段加上一个dT尾巴,主要用于制备T载体。其流程图如下:
产品特点:
1. 简单,2X Tailing Buffer中含有所需要的所有成分,不需要单独准备。
2.适用于任何平末端的DNA片段,包括Pfu DNA成本polymerase等酶合成的DNA片段。
3. 加T后的载体可以作为T载体使用。
产品组成:
| 成分 | 规格 |
| Taq DNA olymerase(5U/μL) | 50μl |
| 2×dT Tailing Buffer | 1.25ml |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。
使用方法:
一:反应前纯化处理:
平末端DNA片段或平末端质粒DNA可以采取胶回收和酚/氯fǎng抽提法等常规方法纯化,zuì后溶解在水或TE中,终浓度以0.1μg/μL为宜。必须注意的是,用Vent,Deep Vent,Pfu,Pwo等具有3到5外切活性的DNA聚合酶扩增得到的DNA片段,必须经过彻底的去除残留的酶的处理过程(如酚/氯fǎng抽提或Proteinase K处理),否则它们将在加T反应时,切除掉加上的T尾巴,干扰反应。
二:加T反应
在干净的0.5mL或1.5mL离心管中,分别加入下列成分:
| 回收的DNA片段 | 0.2-2μg |
| 2×dT Tailing Buffer | 25μL |
| Taq DNA polymerase(5U/μL) | 1μL |
| 补水到 | 50μL |
| 72℃保温2小时 | |
三:反应后处理
加T反应后,Taq DNA polymerase将与DNA末端紧密结合,所以必须酚/氯fǎng抽提去除。如果使用Proteinase K处理后再用酚/氯fǎng抽提效果会更好。得到的DNA溶于适量水和TE中后即可用于后续连接反应。
我公司销售的平末端DNA加T试剂盒报价,质量上佳,价格普惠,欢迎广大新老客户踊跃订购。
风险提示:丁香通仅作为第三方平台,为商家信息发布提供平台空间。用户咨询产品时请注意保护个人信息及财产安全,合理判断,谨慎选购商品,商家和用户对交易行为负责。对于医疗器械类产品,请先查证核实企业经营资质和医疗器械产品注册证情况。
文献和实验【交流】关于NEB的T4 DNA连接酶和快速连接试剂盒的常见问题及解答
连接酶,反应10分钟。平滑末端连接:在20µl反应体系中加入1µl T4 DNA 连接酶反应2小时,或者加入1µl高浓度T4 DNA 连接酶反应10分钟。 另外,NEB的快速连接试剂盒 (Quick Ligation Kit, NEB #M2200V [15个反应])是独有的可以在室温5分钟条件下连接平滑末端和粘性末端的试剂盒。 图1:在25°C条件下,用1 unit(1:400稀释后取1 µl)T4 DNA连接酶连接λDNA/Hind Ⅲ片段(4-碱基粘端)不同反应时间的结果。 图
/GATCY) 这几个酶切产物粘端突出部分都一样是 5’GATC,能互补,可以相互连接。此外,所有平末端酶切产物都可以相互拼接,只是连接效率低些。要是运气再背点、酶切粘端怎么都不配对?用 Klenow 大片段或者T4聚合酶或“削平”或“补齐”得到平末端,再“强行连接”。。。这种目标片段前后都是平端的、或者单酶切的,载体“自恋”(自我连接)还可以用大小区分,目标片段可能正向接入或者倒装,如何在筛选时进行区分,又多了一个麻烦事儿。要是用到甲基化敏感的内切酶,比如 HPhI(对 Dam、Dcm 甲基化敏感
5. 不受粘末端或平末端的限制6. 超简洁反应体系配制:只需将克隆片段与线性化的载体按一定比例加入Lightening Assembly Master Mix即可7. 超快速:克隆连接反应只需10-15分钟较传统克隆方法,操作步骤更少,所需试剂更少,所需时间大大缩短。8. PCR产物可直接与表达载体连接,无需酶切或连入克隆载体。应用范围:1. 平末端和粘末端DNA片段克隆。 2. 1到多个DNA片段克隆。3. 点突变。 4. 长片段克隆。5. DNA片段上有和载体相同的酶切
技术资料暂无技术资料 索取技术资料









