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- 百奥莱博
- BTN60105-GBM
- 北京
- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
246
- 英文名：
dA Tailing Kit
- 保质期：
一年
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件：
低温运输，-20℃
- 规格：
50次
特别提示：包括平末端DNA加A试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
产品名称：平末端DNA加A试剂盒
英文名称：dA Tailing Kit
产品货号：BTN60105
产品规格：50次
本产品利用Taq DNA polymerase的不依赖于模板的末端转移酶活性，在只有dATP 存在的情况下，在平末端的DNA片段加上一个dA 尾巴，使平末端片段也能被T载体克隆。其流程图如下：
产品特点：
1. 简单，2×Tailing Buffer中含有所需要的所有成分,不需要单独准备。
2.适用于任何平末端的DNA片段，包括Pfu DNA polymerase等酶合成的DNA片段。
3.产物可以直接用于与T载体的连接。
试剂盒组成：
| 成分 | 规格 |
| Taq DNA polymerase(5U/μL) | 50μl |
| 2×Tailing Buffer | 1.25ml |
| 说明书 | 1份 |
储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。
使用方法：
一：反应前纯化处理：
用Vent，Deep Vent，Pfu，Pwo等具有3 到5外切活性的DNA聚合酶扩增得到的DNA片段，必须经过彻底的去除残留的酶的处理过程(如酚/lǜ仿抽提或Proteinase K处理)，否则它们将在加A反应时，切除掉加上的A尾巴，干扰反应。可以采取胶回收和酚/lǜ仿抽提法等常规方法纯化，zuì后溶解在水或TE中，终浓度以0.1μg/μL为宜。
二：加A反应
在干净的0.5mL或1.5mL离心管中，分别加入下列成分：
| 回收的DNA片段 | 0.2-2ug |
| 2×dA Tailing Buffer | 25μL |
| Taq DNA polymerase(5U/μL) | 1μL |
| 补水到 | 50μL |
| 72℃保温2小时 | |
三：反应后处理
加A反应后，Taq DNA pol
我公司销售的平末端DNA加A试剂盒报价，质量上佳，价格普惠，欢迎广大新老客户踊跃订购。
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文献和实验《分子克隆》 虽然伟大的、人手必备的“分子生物学宝典”——《分子克隆》——里涵盖了分子生物学领域几乎各种基础技术（新中文版三册足足 3.5 公斤，知识就这么沉重），但实际咱们平时说的分子克隆技术主要是指将含有“目的基因的 DNA 片段”以“体外重组技术”插入某种 DNA 载体上，得到一个重组 DNA 分子。分子克隆技术现在早已算不上是“超酷”的前沿技术，只能算分子生物学基础入门技术，但它依然是整个分子生物学基础的核心之一，熟练掌握分子克隆技术之关键、又快又准地完成分子克隆依然是实验必需的看家
5. 不受粘末端或平末端的限制6. 超简洁反应体系配制：只需将克隆片段与线性化的载体按一定比例加入Lightening Assembly Master Mix即可7. 超快速：克隆连接反应只需10-15分钟较传统克隆方法，操作步骤更少，所需试剂更少，所需时间大大缩短。8. PCR产物可直接与表达载体连接，无需酶切或连入克隆载体。应用范围：1. 平末端和粘末端DNA片段克隆。 2. 1到多个DNA片段克隆。3. 点突变。 4. 长片段克隆。5. DNA片段上有和载体相同的酶切
，能够以模版为准切掉错配的碱基，因而得到的PCR产物多数是平末端，不能用T载体克隆。通常需用目的载体多克隆位点上的平末端单酶切位点，单酶切得到平末端的线性片断，直接连接PCR产物。这类酶得到的产物通常不能用TA克隆试剂盒。目前也有商业化的平末端PCR产物克隆试剂盒，不过较少用。平末端的连接效率低，通常需要高浓度的连接酶，较长的连接时间，合适的片断：载体比例，有的时候还需要调整反应体系的ATP浓度或者增加聚乙二醇（PEG2000），以得到较高的连接效率。许多厂家都有推出快速连接试剂盒
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