- ￥1220
- Takara
- 6127A
- 2025年12月31日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 规格：
24 Rxns
| ■ 制品内容 (24 次量) | ||||||||||||||||||
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| ■ 制品说明 | ||||||||||||||||||
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| ■ 保存 | ||||||||||||||||||
| -20℃。 | ||||||||||||||||||
| ■ Takara BKL Kit原理 | ||||||||||||||||||
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| ■ 注意事项 | ||||||||||||||||||
| 1. Ligation Solution I 请于冰中融解，使用前混匀。应避免多次反复冻融。 2. 连接转化效率低时，请试用下述方法进行改进。 ① 确认感受态细胞的转化效率。 ② 延长连接反应时间至过夜反应。 ③ 连接反应后向溶液中加入NaCl使其终浓度为500 mM，再做细菌转化。 如果以上操作仍不能改善连接效率，则需对连接后的DNA进行纯化。 3. 当使用具有lacZ基因的载体克隆短链DNA片段时，有时即使插入了DNA片段也会有不出现停止密码或者读框不改变的情况发生，在颜色选择培养基上形成淡蓝色的单菌落。 4. 短链DNA克隆时，有时会有插入内含数个串联DNA片段的克隆体出现。 5. 如果PCR反应过程中需要加入矿物油，则要注意勿将其带入后面的反应液中。 6. 带有磷酸基的3’凹陷末端的DNA片段无法使用本试剂盒进行末端平滑化反应。 | ||||||||||||||||||
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文献和实验Blunt PCR克隆乃利用传统T4连接酶方法，但载体和Topo平端的一样，含ccdB基因，所以同样可降低菌落背景，易于筛选。 表10 PCR克隆试剂盒的选择 Amplification Enzyme Application of Cloned PCR Product Ligation Method Product
【交流】关于NEB的T4 DNA连接酶和快速连接试剂盒的常见问题及解答
连接酶，反应10分钟。平滑末端连接：在20µl反应体系中加入1µl T4 DNA 连接酶反应2小时，或者加入1µl高浓度T4 DNA 连接酶反应10分钟。 另外，NEB的快速连接试剂盒 (Quick Ligation Kit, NEB #M2200V [15个反应])是独有的可以在室温5分钟条件下连接平滑末端和粘性末端的试剂盒。 图1：在25°C条件下，用1 unit（1:400稀释后取1 µl）T4 DNA连接酶连接λDNA/Hind Ⅲ片段(4-碱基粘端)不同反应时间的结果。 图
和Topo平端的一样，含ccdB基因，所以同样可降低菌落背景，易于筛选。 表10 PCR 克隆 试剂盒的选择 Amplification Enzyme Application of Cloned PCR Product Ligation Method
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