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免疫共沉淀检测服务
基本原理是在细胞裂解液中加入抗原特异的抗体进行孵育,若裂解中有和抗原互作的蛋白,则会形成“抗体-抗原-抗原互作蛋白”的免疫复合物,该免疫复合物经纯化、洗脱、收集,即可用于SDS-PAGE,western blot及质谱分析,进而鉴定出与抗原有互作的蛋白质。
客户提供:
1、组织、细胞、蛋白质溶液等样品、用于免疫共沉淀的一抗及目的蛋白的相关信息;
2、如需构建基因的过表达载体,则还需提供过表达载体及其相关信息,没有载体的我司可以构建载体;
3、其他与免疫共沉淀相关信息。
结果交付:
1、免疫共沉淀电子图片及分析结果;
2、相互作用蛋白鉴定结果;
3、完整的实验步骤、使用仪器、软件检索参数等。
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文献和实验原理 免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是利用抗原和抗体的特异性结合以及 Protein A 或 G 特异性地结合到抗体的Fc 片段的现象探测两个蛋白分子间是否存在相互作用的一种方法。在细胞裂解液中加入针对蛋白M的抗体,孵育后再加入Protein A 或 G 预处理的 Sepharose 珠,若细胞中有与蛋白M结合的蛋白 N,就可以形成这样一种复合物:“蛋白 N-蛋白M—抗蛋白 M 抗体—Protein A 或 G—Sepharose 珠”,经 SDS
免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。它可以: 测定两种目标蛋白质是否在体内结合; 确定一种特定蛋白质的新的作用搭档; 分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物。 一、实验原理 当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留了下来。如果用蛋白质 X 的抗体免疫沉淀 X,那么与 X 在体内结合的蛋白质 Y 也能沉淀下来。 目前多用精制的 prorein A 预先结合固化
一、IP前的准备工作: coIP:分为内源性蛋白的相互作用和非内源性蛋白相互作用(后者包括外源蛋白之间以及外源拖内源蛋白)。 非内源性蛋白的相互作用,主要是通过过表达来实现,通常为简化实验、提高IP效率会让外源蛋白带上标签(tagged;这也是没有相应的可用于IP的内源蛋白抗体之前唯一可行的方案),因此就tag的使用而言存在很多小技巧。 1. His-tagged主要用于纯化蛋白。有些人喜欢用His-tagged蛋白然后进行coIP,实际上它存在潜在的隐患。当初鄙人用Sigma
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