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        【求助】免疫共沉淀问题

        丁香园论坛

        2676
        有郁闷问题想请教各位大侠:
        我做免疫共沉淀,从细胞中提取内源性表达的蛋白,按照常规方法做,可是最后银染总是没有条带?
        多谢多谢!
        有几个问题需要确认一下:

        1. 你做免疫共沉淀(IP)的抗体是否可以用。WEstern能识别的抗体不一定能用在IP。

        2. 内源性蛋白的表达量。需要先确认一下这个蛋白的表达量,如果这个蛋白本来表达量就很低,那么做IP的难度就很大,这时候需要考虑过量表达这个蛋白了。或者需要收集大量的细胞来跑胶。

        3. 银染的问题。我觉得你做IP首先要确认的是你的目的蛋白是否有被IP下来。最好用western检测一下IP沉淀中是否含有你要的内源性表达的蛋白,有的话再进一步做银染。银染的上样量可以大一些。当然我觉得可能你在IP的过程中出现问题的几率比较大。

        祝好运。
        同意!
        分析的很好!学习了

        woxingwosu wrote:
        有几个问题需要确认一下:

        1. 你做免疫共沉淀(IP)的抗体是否可以用。WEstern能识别的抗体不一定能用在IP。

        2. 内源性蛋白的表达量。需要先确认一下这个蛋白的表达量,如果这个蛋白本来表达量就很低,那么做IP的难度就很大,这时候需要考虑过量表达这个蛋白了。或者需要收集大量的细胞来跑胶。

        3. 银染的问题。我觉得你做IP首先要确认的是你的目的蛋白是否有被IP下来。最好用western检测一下IP沉淀中是否含有你要的内源性表达的蛋白,有的话再进一步做银染。银染的上样量可以大一些。当然我觉得可能你在IP的过程中出现问题的几率比较大。

        祝好运。

        本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的好伙伴

        师兄微信号:shixiongcoming

        【求助】免疫共沉淀问题

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