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凝胶阻滞或电泳迁移率实验(Electrophoretic mobility shift assay,EMSA)是一种研究DNA结合蛋白质和相关的DNA结合序列相互作用的技术,可用于定性和定量分析
蛋白质可以与末端标记的核酸探针结合,在琼脂糖胶或非变性胶中电泳时这种复合物比无蛋白结合的探针在凝胶中泳动的速度慢,即表现为相对滞后。该方法可用于检测DNA结合蛋白、RNA结合蛋白,并可通过加入特异性的抗体(supershift)来检测特定的蛋白质,进行未知蛋白的鉴定。结合的蛋白转录或调节因子。
服务流程:
1、核蛋白样本提取与蛋白定量;
2、生物素标记DNA3’端;
3、Super-Shift反应,EMSA室温结合反应,电泳上样;
4、电转膜,操作方法同常规Western blot转膜操作;
5、紫外交联,将核酸交联于PVDF膜上;
6、化学发光法检测生物素标记的探针。
客户提供:
组织、细胞样品或核蛋白
结果交付:
样品质检报告、实验数据分析、实验方法及样品EMSA电泳图。
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文献和实验凝胶迁移实验有称凝胶阻滞实验或电泳迁移率实验(EMSA,electrophoretic mobility shift assay),是一种用于蛋白与核算相互作用的技术。最初是用于转录因子与启动子相互作用的验证性实验,也可应用与蛋白-DNA、蛋白-RNA互作研究。 一、实验原理 EMSA主要基于蛋白-探针复合物在在凝胶电泳过程中迁移较慢的原理。根据实验设计特异性和非特异性探针,当核酸探针与样本蛋白混合孵育时,样本中可以与核酸探针结合的蛋白质与探针形成蛋白-探针复合物;这种复合
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