miRNA靶基因3’UTR载体

　　

将miRNA mimic与pmiR-RB-Report™报告基因质粒载体共转目的细胞系，通过萤火虫荧光素酶的活性分析，即可获得miRNA对潜在靶基因的调控作用的验证数据。

pmiR-RB-Report™报告基因质粒载体转录后可形成萤火虫荧光素酶与靶基因3’UTR区域组合而成的特殊mRNA，如果miRNA mimic能够与包含靶基因3‘UTR的mRNA互补结合，则荧光素酶的表达活性也收到显著调控，故通过检测荧光素酶的荧光强度即可定量分析miRNA对靶基因的mRNA调控效果。

　

由于pmiR-RB-Report™报告基因的3’UTR长度不一，大多数长度为1～2.5kb之间。一般建议构建长度不超过2.5kb，同时建议构建单位点突变载体。

　　

将pmiR-RB-Report™ h-AKT1报告基因质粒载体(1ug)及hsa-miR-146a mimic (50nM)共转A549细胞系，采用双荧光素酶检测试剂盒检测结果表明hsa-miR-146a对AKT1 3‘UTR有显著调控作用。

　 将pmiR-RB-Report™ h-BCL2报告基因质粒载体(1ug)及hsa-miR-9 mimic (50nM)共转A549细胞系，采用双荧光素酶检测试剂盒检测结果表明hsa-miR-9对BCL2 3’UTR有较明显调控作用。

miRNA靶基因3’UTR质粒载体使用说明.pdf

应用实例：

1)Yan Liang,Yuanyuan Li, Zhengli Li , Zhuo Liu, Zhiping Zhang, Shaoyan Chang, Jianxin Wu. Mechanism of folate deficiency-induced apoptosis in mouse embryonic stem cells: Cell cycle arrest/apoptosis in G1/G0 mediated by microRNA-302a and tumor suppressor gene Lats2.INT J BIOCHEM CELL B.Volume 44, Issue 11, November 2012(1750–1760).

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3) 定制时间依据具体基因及其3’UTR长度而定。