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- 2025年07月16日
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简介：
lncRNA的作用机制有很多，以ceRNA（competing endogenous RNA，竞争性的内源RNA）形式发挥功能是其中的一种，即lncRNA与靶基因的3’UTR竞争结合相同的microRNA，降低microRNA对靶基因的抑制功能，从而上调靶基因的表达量。为了检测其效果，我们可以用Western Blot检测靶蛋白的表达水平，也可以用qRT-PCR检测靶基因的表达。但是这两种方式都无法确定lncRNA是否通过ceRNA方式调控靶基因的表达。因此，我们可以通过“microRNA与lncRNA结合验证”，“microRNA与靶基因结合验证”和“lncRNA与靶基因3’UTR竞争结合microRNA验证”实验，构建Sensor reporter并进行活性检测，对lncRNA，microRNA与靶基因这三者间的作用机制作出准确判断。
服务优势：
（1）利用专业软件进行miRNA与lncRNA和靶基因3’UTR区的结合位点预测；
（2）采用Promega公司特有psiCHECK质粒；
（3）所采用的Luciferase双荧光报告系统，可以获得宽泛的线性定量范围与极高的灵敏度；
（4）采用瞬时转染技术，操作简便、快速，周期短，适用于绝大多数细胞类型。
服务流程：
一、microRNA与lncRNA结合验证
（1）直接合成靶lncRNA序列或microRNA在靶lncRNA上的结合位点序列；
（2）将上述合成的DNA片段克隆至报告基因载体psiCHECK质粒；
（3）购买microRNA mimics；
（4）将报告载体与microRNA mimics共转染293T细胞；
（5）多功能酶标仪检测报告基因的表达水平；
（6）数据分析，整理提交客户原始数据及项目报告；
注：为了实验的严谨性，可加入靶lncRNA序列中microRNA预测结合区域的突变体作为对照，进一步说明问题。
二、microRNA与靶基因结合验证
（1）直接合成靶基因3’UTR序列或microRNA在靶基因3’UTR上的结合位点序列；
（2）将上述合成的DNA片段克隆至报告基因载体psiCHECK质粒；
（3）购买microRNA mimics；
（4）将报告载体与microRNA mimics共转染293T细胞；
（5）多功能酶标仪检测报告基因的表达水平；
（6）数据分析，整理提交客户原始数据及项目报告；
注：为了实验的严谨性，可加入靶基因3’UTR区microRNA预测结合区域的突变体作为对照，进一步说明问题。
三、lncRNA与靶基因3’UTR竞争结合microRNA验证
（1）直接合成靶基因3’UTR序列或microRNA在靶基因3’UTR上的结合位点序列；
（2）将上述合成的DNA片段克隆至报告基因载体psiCHECK质粒；
（3）直接合成lncRNA序列，构建lncRNA过表达质粒；
（4）将报告载体与lncRNA表达载体共转染293T细胞；
（5）多功能酶标仪检测报告基因的表达水平；
（6）数据分析，整理提交客户原始数据及项目报告；
注：为了实验的严谨性，可加入靶基因3’UTR区microRNA预测结合区域的突变型报告载体及lncRNA序列中microRNA预测结合区域的突变型表达载体作为对照，进一步说明问题。
参考文献：
Cesana, M., et al. (2011). "A long noncoding RNA controls muscle differentiation by functioning as a competing endogenous RNA." Cell147(2): 358-369.
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文献和实验（图4），纤突蛋白先与细胞膜表面的嵌合抗原受体（CAR）结合，接着五邻体蛋白与细胞膜上的整合素αVβ相互作用，通过内吞作用将腺病毒转移到胞内。根据纤突蛋白的不同，汉恒生物不仅能提供常规的Ad5，还拥有自主研发的改良型腺病毒载体—Ads，它能高效感染悬浮细胞、专用于原代T细胞。 图4 腺病毒感染细胞过程 表2 腺病毒产品比较 总之，细胞实验和动物实验都可以用腺病毒，可见其在科研领域适用范围之广。汉恒生物的腺病毒产品成功助力许多生物医学研究人员发表相关文献，下面我们通过一些汉恒
、AKT 和 NLRP3 等多种信号通路，具有良好的安全性。体内研究进一步证实，BBR 以 EIF2AK2 依赖性方式抑制炎症反应，因此，抑制 EIF2AK2 二聚体形成可能成为治疗炎症等相关疾病的重要靶点。值得注意的是，本研究使用了汉恒生物提供的敲低 EIF2KA2 的腺相关病毒（AAV）。 下面，我们一起来看具体的研究结果： 首先，作者在 THP-1 细胞中筛选并评估了 BBR 靶标的荧光标记，最终选择了 11b 作为功能性探针，通过生信分析以及 11b 探针下拉实验表明，EIF2AK2、eEF
基因。结果发现，161个蛋白中的29个蛋白的表达含量在突变体中发生变化，这可能是由于let-7基因和不同的靶点互作结果——该结果得到了独立下游实验包括遗传互作、多聚核糖体分析和荧光素酶检测的验证。 SRM技术可以作为一个验证工具来进一步探讨对于靶点的理解;此外，SRM也可能用来精细描述目标蛋白质组 亚群，促进miRNA生物功能模型的研究。(科学网 任春晓/编译) 相关方法：“选择性反应监测”技术 完成人：迈克尔•恩加特纳研究组/吕迪&bull
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