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- 文献和实验
- 技术资料
- 提供商:
辉骏生物
- 服务名称:
基因敲除单克隆株(Crispr-cas9)
- 规格:
基因敲除单克隆株(Crispr-cas9)实验价格请联系辉骏生物:4006991663
基因敲除单克隆细胞株构建技术原理
CRISPR-Cas9是基于细菌和古细菌适应性免疫系统开发的基因编辑技术。该系统包含一个可以特异性识别靶DNA序列的gRNA,和一个可以结合和编辑DNA的Cas9核酸酶,在gRNA的引导下,Cas9蛋白精确识别并切割目标DNA序列。Cas9蛋白中的两个核酸酶活性位点分别切割靶序列中的两条链[一个核酸酶活性位点作用于一条链],产生双链断裂(DSB) 。双链断裂通常通过非同源末端连接(NHEJ)来修复,在修复过程中,常常会产生非三倍数的插入或缺失(indel),导致移码突变,造成靶基因失活,从而实现基因敲除。
相比于会残留部分基因功能的RNA干扰技术,基因敲除可以将基因功能完全消除,所以已经被越来越多地用于基因功能研究中。
辉骏生物采用CRISPR-Cas9技术构建的基因敲除单克隆细胞株,可实现对细胞基因组靶位点的永久敲除。

基因敲除单克隆细胞株构建技术优势
1.非病毒系统的基因递送:电转法,可实现高效基因递送且脱靶率低
2.周期短:不需要进行慢病毒包装等步骤,实验周期短,细胞交付快至6周
3.使用高效的电转设备,具备更高的电转效率和细胞存活率
4.优化的单克隆细胞筛选方法,阳性率大幅提高,使实验一步到位
基因敲除单克隆细胞株构建实验流程图

基因敲除单克隆细胞株构建 * 辉骏服务内容
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服务内容 |
交付内容 |
周期 |
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1. 预实验: 细胞转导测试、抗性筛选测试、单克隆生长测试 |
1、单克隆细胞株:2个T25瓶(10^6个细胞/瓶) 2、结题报告:质粒构建、克隆筛选、敲除鉴定等操作和结果 |
6-10周 |
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2. 正式实验: gRNA序列设计、cas9-gRNA载体构建、电转细胞、多克隆细胞株筛选、单克隆细胞株筛选、敲除效率验证、细胞扩大培养和保存 |
基因敲除单克隆细胞株构建 * 辉骏服务优势
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效果保障,不成功不收费 无效全额退款,100%保证目标基因编辑/表达效果 |
效率保障 快至6周可交付合格细胞株 |
售后保障 实验疑问随时快速响应 |
基因敲除单克隆细胞株构建实验 * 辉骏生物服务案例
本案例在人HCT116细胞中进行基因编辑,电转后筛选获得的单克隆细胞,通过PCR和Sanger测序验证表明,该细胞在sgRNA2和sigRNA3靶位点分别发生缺失1个碱基的纯合突变,可引起移码敲除。Western-Blot实验确认了敲除结果。

Sanger测序结果图

Western-Blot检测结果图
辉骏实力


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文献和实验、敲低还是敲除,科学问题是否匹配 是否准备必要的阴性/阳性/救援或突变对照 验证是否覆盖DNA/RNA/蛋白/功能中的关键层级 载体和报告系统是否会干扰生物学结论 从“知道原理”到“真正能做” sgRNA 设计、克隆筛选、病毒送递哪一环出问题,KO 课题都可能卡住。尤其难转染细胞和体内实验,载体选慢病毒还是 AAV、sgRNA 怎么排布、要不要多靶点串联,这些往往决定了成败。吉凯基因在 CRISPR 载体与病毒包装上积累了很多客户案例,可以从 sgRNA 设计、载体构建到慢病毒/AAV 包装一站
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技术服务。我想,死马当活马医,试试看吧,网上搜索到了几家这样的公司。因为不了解,我仔细看了看这些公司的官网介绍,发现其中有一家上海邦耀生物,在国内首次报道了利用TALEN构建基因敲除小鼠的工作,而且相关论文发表在《Nucleic Acids Research》上,就发了封邮件过去,简单说明了我的问题和需求。他们的回复挺让我意外的,因为他们并不推荐我用TALEN技术,而是介绍了一种新的CRISPR/Cas9技术,如下: CRISPR/Cas9 是一种高效,低毒且准确靶向的新型转基因系统。CRISPR是从
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