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- 2025年10月19日
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电泳迁移率变动分析（electrophoretic mobility shift assays，EMSA），又叫凝胶阻滞电泳，是近年发展起来的研究核酸与蛋白质相互作用的简单、快速、敏感的方法，目前已经成为转录因子研究的经典方法。其基本原理是核酸与蛋白质发生作用时会形成核酸-蛋白质复合物，这种复合物在凝胶中比未结合蛋白质的核酸泳动速度慢，即形成一条相对滞后的条带。该方法可用于检测DNA结合蛋白、RNA结合蛋白，并可通过加入特异性的抗体来检测特定的蛋白质。
PIERCE将其卓越的SuperSignal®化学发光检测系统和DNA末端生物素标记技术应用于传统的EMSA，利用HRP标记的链亲和素与标记在DNA上的生物素之间的超强结合，使HRP固定在DNA上并催化发光底物反应发光，再通过X光片或冷光CCD检测。
特点/优点：
* 安全环保：采用非同位素的化学发光检测系统，免除放射性的危险与处理同位素废物的麻烦，减少环境污染；无须专门的同位素操作室，易于使用推广。
* 高灵敏度：PIERCE的SuperSignal® Dura底物使检测灵敏度达到10-14克，等同于或者超过同位素标记系统。
* 快速省时：从标记探针到结果分析，全部实验只需5小时。
* 稳定可靠：DNA末端标记生物素，不影响蛋白结合位点。标记好的DNA可以保存一年。
* 配备完整：该试剂盒包括EBNA对照系统、化学发光检测系统等所有试剂，需要自备的只有生物素末端标记的DNA、蛋白质样品、尼龙膜和电泳设备。
EMSA订货信息
| 货号 |
产品描述 |
规格 |
价格 ( ￥ ) |
| 20148 |
LightShift® 化学发光 EMSA 试剂盒 |
Kit |
4970.00 |
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可用于100次结合试验和检测800cm2 的膜 |
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包括：10× Binding Buffer |
1 ml |
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Biotin-EBNA Control DNA |
50 µl |
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Unlabeled EBNA DNA |
50 µl |
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EBNA Extract |
125 µl |
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Poly (dIŸdC) |
125 µl |
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50% Glycerol |
500 µl |
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1% NP-40 |
500 µl |
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1 M KCl |
1 ml |
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100 mM MgCl2 |
500 µl |
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200 mM EDTA, pH 8.0 |
500 µl |
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5× Loading Buffer |
1 ml |
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Stabilized Streptavidin-HRP Conjugate |
1.5 ml |
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Chemiluminescent Substrate Luminol/Enhancer Solution |
80 ml |
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Stable Peroxide Solution |
80 ml |
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Blocking Buffer |
500 ml |
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4× Wash Buffer |
500 ml |
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Substrate Equilibration Buffer |
500 ml |
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文献和实验Introduction to the EMSA (Gel Shift) Technique
- + + + Unlabeled EBNA DNA - - + - Unlabeled Oct-1 DNA - - - + Figure 16. EMSA results using the EBNA
EMSA using ds Oligonucleotides
EMSA using ds Oligonucleotides Solutions 10X Annealing Buffer 200 mM Tris 8.0 200 m l 1M Tris pH 8.0 10 mM EDTA 8.0 20 m l .5M EDTA pH 8.0 500 mM NaCl 100 m l 5M NaCl 280 m l Q store at room
稳定液D:1ul; ③探针:lul; ④去离子水:4ul 。 D 、将探针棍合物加入预孵育好的核提取物混合物中，用移液器轻轻吸打混匀后，4 ℃ 继续孵育20 分钟。 E,EMSA 测定: 预先将5% 非变性丙烯酞胺胶(38:2 ) 和电泳 缓冲液(1X TGE) 预冷至4 ℃ , 然后: ①将每反应管内所有反应物加入样品孔中。同时在一空白孔中加入含溟酚蓝的上样缓冲液，以观测胶的移动情况。当溟酚蓝电泳 至玻璃板下1/3 即可停止电泳 ( 约2 小时) 。②电泳
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