BCA蛋白浓度测定试剂盒

BCA蛋白浓度测定试剂盒

BCA（bicinchonininc acid）与二价铜离子的硫酸铜等其它试剂组成的试剂混合一起显示为苹果绿色，即BCA工作试剂。在碱性条件下，BCA与蛋白质结合时，蛋白质将Cu2+还原为Cu+。工作试剂由原来的苹果绿色变为紫色复合物。562 nm下其光吸收强度与蛋白质浓度成正比。

BCA蛋白浓度测定试剂盒是根据目前世界上最常用的两种蛋白浓度检测方法之一——BCA法研制而成。实现了蛋白浓度测定的简单、高稳定性、高灵敏度和高兼容性。

BCA蛋白浓度测定试剂盒产品特色
灵敏度高：检测浓度下限达到20 μg/mL，最小检测蛋白量达到0.5 μg，待测样品体积为10 μL。在50-2000 μg/mL浓度范围内有较好的线性关系。
干扰物质少：BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响，可以兼容样品中高达5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween 20、60、80。

成分
试剂A                            100 mL
试剂B                            2 mL
标准蛋白（BSA）       1 mL×2，1 mg/mL

BCA蛋白浓度测定试剂盒保存条件
运输温度：室温     （标准蛋白4-8 ℃运输）     
保存温度：室温     （标准蛋白-20 ℃保存）
有效日期：12个月

BCA蛋白浓度测定试剂盒使用方法
方法一：96孔板法
1. 配制BCA工作液：根据标准品和样品数量，按50体积试剂A，1体积试剂B配制适量BCA工作液。充分混匀。
2. 将蛋白标准品按0 μL，1 μL，2 μL，4 μL，6 μL，8 μL，10 μL加入96孔板的蛋白标准品孔中。加灭菌双蒸水补足到10 μL。取10 μL待测样品加入96孔板的待测样品孔中。每个测定要做2~3个平行。
3. 向待测样品孔和蛋白标准品孔中各加入200 μL BCA工作液（即样品与工作液的体积比为1:20），混匀。
4. 37 ℃温浴30 min。冷却至室温。
5. 酶标仪562 nm波长下测定吸光度。
6. 制作标准曲线。从标准曲线中求出样品浓度。


方法二：试管法
1. 配制工作液：根据标准品和样品数量，按50体积试剂A，1体积试剂B配制适量BCA工作液，充分混匀。工作液配制的量要与测定所用的比色杯对应。每个测定要做2~3个平行。本处列举的比色体系所用的是0.5 mL的比色杯。如比色杯规格不同，体系需要放大到实验将采用的比色杯准确读数所需要的体积。
2. BSA标准品和样品的准备：样品用水或其它不干扰显色反应的缓冲液配制，使待测定的浓度位于标准曲线的线性部分。每个反应准备3个平行测定。标准曲线一般5~6个点即可。根据样品的估测浓度确定各点的具体浓度。稀释BSA时可以用水或与样品一致的溶液。如待测样品的浓度约为200 μg/mL，可按下表的次序加入BSA标准品、样品及BCA工作液。
3. 取适量体积的标准蛋白，以蛋白液：工作液=1:20的比例混匀。37 ℃温浴30 min。冷却至室温。
4. 将样品与标准品在562 nm波长下测定吸光度。


BCA蛋白浓度测定试剂盒注意事项
1. 反应颜色的深浅除了与样品的蛋白浓度相关外还与反应的温度有关。如果样品的浓度介于50 μg/mL~2 mg/mL之间，反应温度一般采用37 ℃。如果样品蛋白的浓度较低（低于50 μg/mL），反应温度可采用60 ℃。高温下色氨酸、酪氨酸和肽键得到充分氧化，可大大提高检测灵敏度。
2. 检测受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响。需确保EDTA低于10 mM，无EGTA，二硫苏糖醇低于
1 mM，β-巯基乙醇低于0.01%。
3. 测定需酶标仪或分光光度计一台，测定波长为540-595 nm之间，562 nm最佳。使用分光光度计测定蛋白浓度时，每个试剂盒可以测定的样品数量会显著减少。
4. 试剂A和B在室温的稳定期至少1年以上。标准蛋白液需保存在-20 ℃，短期则4 ℃保存。

产品目录

货号	产品名称	规格	报价(元)
XY12001A	BCA蛋白浓度测定试剂盒	500次	298