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- Thermo scientific -fermentas
- ER0421
- 2025年09月25日
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- 详细信息
- 技术资料
- 库存：
大量
|
| Catalog# | Size, concentration | Supplied with: | Certificate of Analysis | MSDS | |
| 10X Buffer B | 10X Buffer Tango™ | ||||
| ER0421 | 1000 u (10 u/µl) | 1.00 ml | 1.00 ml | ER0421 | |
| ER0422 | 5000 u (10 u/µl) | 2 x 1.00 ml | 1.00 ml | ER0422 | |
Reaction conditions
| Recommended buffer for 100% activity | Optimal temperature | Enzyme activity in Fermentas buffers, % | Tango™ buffer for double digestion | |||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| B (blue) 1X |
G (green) 1X |
O (orange) 1X |
R (red) 1X |
Tango™ (yellow) 1X / 2X |
||||
| B | 37°C | 100 | 50-100 | 20-50 | 20-50 | 50-100 | 0-20 | 1X |
Lambda DNA
0.7%琼脂糖
6 切割位点
100%酶活性的反应条件
1X 缓冲液B：
10 mM Tris-HCl (pH 7.5, 37°C), 10 mM MgCl2 , 0.1 mg/ml BSA。
37°C酶切。
10 mM Tris-HCl (pH 7.5, 37°C), 10 mM MgCl2 , 0.1 mg/ml BSA。
37°C酶切。
保存缓冲液
Eco147I保存在：
10 mM Tris-HCl (pH 7.4, 25°C), 100 mM KCl, 1 mM DTT, 1 mM EDTA, 0.2 mg/ml BSA和50% �v/v)甘油。
10 mM Tris-HCl (pH 7.4, 25°C), 100 mM KCl, 1 mM DTT, 1 mM EDTA, 0.2 mg/ml BSA和50% �v/v)甘油。
连接和重新酶切
50倍Eco147I过量酶切后，超过90%的酶切产物可以连接和重新酶切。
琼脂糖包埋DNA酶切
至少需要5 unit限制酶才能在16小时内完全切割1 µg琼脂糖包埋的λ DNA。
备注
重叠的Dcm甲基化抑制Eco147I酶切。为了避免Dcm甲基化的影响，样本DNA需要从dam-, dcm- 菌株中抽提，如GM2163 (#M0099)。
商业化同裂酶
采用REsearch™软件寻找同功酶。
双酶切
采用DoubleDigest™软件确定双酶切的最佳条件。
甲基化影响
Dam: 无重叠 – 不影响。
Dcm: 可能重叠 – 阻止酶切。
CpG: 无重叠 – 不影响。
EcoKI: 无重叠 – 不影响。
EcoBI: 可能重叠 – 影响不确定。
Dcm: 可能重叠 – 阻止酶切。
CpG: 无重叠 – 不影响。
EcoKI: 无重叠 – 不影响。
EcoBI: 可能重叠 – 影响不确定。
| Methylation type | Sequence | Cleavage effect |
|---|---|---|
| Dcm (CCWGG) | 5'...AGGCm5CT GG ...3' |
阻止酶切 |
| bp from the recognition site to fragment end | ||||
|---|---|---|---|---|
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| 0 | 50-100 | |||
| Lambda | ΦX174 | M13mp18/19 | pBR322 | puc18/19 | pUC57 |
|---|---|---|---|---|---|
| 6 | 1 | 0 | 0 | 0 | 1 |
| pTZ19R/U | pTZ57R | pBluescriptIIKS(-/+) | pBluescriptIISK(-/+) | pACYC177 | pACYC184 |
| 0 | 1 | 0 | 0 | 2 | 0 |
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