BdaI

100%酶活性的反应条件

[1X 缓冲液G] + SAM：
[10 mM Tris-HCl (pH 7.5, 37°C), 10 mM MgCl₂ , 50 mM NaCl, 0.1 mg/ml BSA] + 0.05 mM S-腺苷甲硫氨酸。
30°C酶切。

保存缓冲液

BdaI保存在：
10 mM磷酸钾 (pH 7.4, 25°C), 100 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1 mM DTT, 0.2 mg/ml BSA和50% (v/v)甘油。

连接和重新酶切

10倍BdaI过量酶切后，超过70%的酶切产物可以连接，但是由于连接产物上限制酶位点甲基化而不能重新酶切。

备注

• BdaI可能会吸附在切割的DNA分子上， 从而改变DNA条带的电泳迁移率。为避 免出现非正常条带，上样电泳前，采 用6X Loading Dye & SDS溶液(#R1151)处理 样本，或者在DNA酶切产物中加入SDS并 加热处理。
• 底物为λ DNA (dam- ) (#SD0021)。
• 重叠的Dam甲基化抑制BdaI酶切。为了避免Dam甲基化的影响，样本DNA需要从dam-, dcm- 菌株中抽提，如GM2163 (#M0099)。
• 37°C酶切时只有30%的酶活性。
• 酶活性需要添加剂S-腺苷甲硫氨酸。但是BdaI还是很难完全酶切某些底物DNA分子。
• BdaI浓度是底物DNA分子获得最大切割水平时对应的浓度，并且要保证此浓度不会改变酶切的带型。
• BdaI在识别序列两端酶切。酶切的具体碱基位置因底物序列不同会有1个碱基的偏差，但是图示中的切割方式占大多数。
• 超过40倍过量酶切会导致星活性。

商业化同裂酶

采用REsearch™软件寻找同功酶。

双酶切

采用DoubleDigest™软件确定双酶切的最佳条件。

甲基化影响

Dam: 可能重叠 – 阻止酶切。
Dcm: 无重叠 – 不影响。
CpG: 无重叠 – 不影响。
EcoKI: 无重叠 – 不影响。
EcoBI: 无重叠 – 不影响。