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FastDigest® SfiI

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  • Thermo scientific -fermentas
  • FD1824
  • 2025年10月02日
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      大量

    • - 推荐的缓冲液 : FastDigest®缓冲液
    • - 孵育温度50°C
    • - 连接效率95%
    • - Dcm甲基化重叠可能影响DNA切割
    • - CpG甲基化重叠可能影响DNA切割
    • - 80°C加热20分钟不会使酶失活
    • - 蓝/白鉴定
    • - LO合格
    Catalog# Size, concentration Supplied with: Certificate of Analysis MSDS
    10X FastDigest® Buffer 10X FastDigest® Green Buffer
    FD1824 150 µl (150 react.) 1.00 ml 1.00 ml FD1824
    Reaction conditions
    Reaction temperature Digestion time with 1µl of FastDigest® enzyme, min bp from end of DNA required for complete digestion Thermal inactivation Incubation time without star activity, hours
    Lambda, 1µg/20µl Plasmid DNA, 1µg/20µl PCR product, ~0.2µg/30µl Genomic DNA, 1µg/10µl
    50°C no sites
    (pUC19-SfiI DNA,
    15 min)
    15 15 15 5 No
    (chloroform extraction)
    16

    pUC19 DNA片段中插入有
    SfiI识别位点
    0.7%琼脂糖
    2 切割位点

    配方
    1 µl (1 FDU)是指在37°C,1X FastDigest® 缓冲液中5分钟内酶切1 µg pUC19 DNA片段中插入有SfiI识别位点 所需的酶量。

    推荐反应条件
    1X FastDigest®缓冲液或 1X FastDigest® Green 缓冲液,50°C。
    1 µl FastDigest® SfiI可在
    – 15分钟内酶切1 µg pUC19 DNA片段中插入有SfiI识别位点;
    – 15分钟内酶切1 µg质粒DNA;
    – 15分钟内酶切0.2 µg PCR扩增产物;
    – 15分钟内酶切1 µg基因组DNA或60分钟内酶切5 µg基因组DNA。

    备注
    至少需要两个拷贝的FastDigest® SfiI识别位点才能保证有效酶切。

    商业化同裂酶
    采用REsearch™软件寻找同功酶。

    甲基化影响
    Dam: 无重叠 – 不影响。
    Dcm: 可能重叠 – 部分影响。
    CpG: 可能重叠 – 部分影响。
    EcoKI: 无重叠 – 不影响。
    EcoBI: 无重叠 – 不影响。

    Methylation type Sequence Cleavage effect
    Dcm (CCWGG)

    5'...GGCm5CW GG NNGGCC...3'
    3'...CCG GWm5CC NNCCGG...5'

    部分影响
    Dcm (CCWGG)

    5'...Cm5CW GG CC(N)5 GGCm5CW GG ...3'
    3'...G GWm5CC GG(N)5 CCG GWm5CC ...5'

    不阻止酶切
    CpG

    5'...m5C G GCC(N)5 GGCm5C G ...3'
    3'... Gm5C CGG(N)5 CCG Gm5C ...5'

    不阻止酶切
    CpG

    5'...GGCm5C G (N)4 GGCC...3'
    3'...CCG Gm5C (N)4 CCGG...5'

    部分影响
    CpG

    5'...GGCm5C G (N)3m5C G GCC...3'
    3'...CCG Gm5C (N)3 Gm5C CGG...5'

    阻止酶切
    Number of recognition sites in DNA molecules
    Lambda ΦX174 M13mp18/19 pBR322 puc18/19 pUC57
    0 0 0 0 0 0
    pTZ19R/U pTZ57R pBluescriptIIKS(-/+) pBluescriptIISK(-/+) pACYC177 pACYC184
    0 0 0 0 0 0

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