说明
phi29 DNA Polymerase是一种高持续扩增能力的聚合酶(最长达70 kb),具有很强的链置换活性,适合高效的等温DNA扩增(1)。此外,phi29 DNA Polymerase还具有单链DNA偏好的3’→5’外切酶(校正)活性(2),因此重点推荐使用3’-端修饰的引物 (4)。
来源
大肠杆菌菌株,含有Bacillus subtilis噬菌体phi29来源的克隆基因2。
分子量
66.7 kDa,单体。
活性单位定义
1个活性单位是指在30°C、10分钟内将0.5 pmol dCMP合成掺入多聚核苷酸片段(吸附在DE-81上)所需的酶量。
酶活性分析混合物:50 mM Tris-HCl (pH 7.5), 10 mM MgCl2, 1 mM DTT, 0.01 mg/ml lambda DNA/HindIII, 0.2 µM dCTP (含[3H]-dCTP), 0.2 mM dATP, 0.2 mM dGTP, 0.2 mM dTTP.
特异性活性
100,000 u/mg
保存缓冲液
保存缓冲液组分:
50 mM Tris-HCl (pH 7.5), 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, 100 mM KCl, 0.5% (v/v) Nonidet P40, 0.5% (v/v) Tween 20和50% (v/v)甘油。
10X 反应缓冲液
330 mM Tris-acetate (pH 7.9, 37°C), 100 mM Mg-acetate, 660 mM K-acetate, 1% (v/v) Tween 20, 10 mM DTT。
质量控制
测试表明无内切脱氧核糖核酸酶污染。
抑制与失活
- 抑制剂:aphidicolin, N2-(p-n-butylphenyl)-dGTP (BuPdGTP), 2-(p-n-butylanilino)-dATP (BuAdATP) (20)。
- 失活:65°C加热10分钟。
备注
含有phi29 DNA Polymerase的反应体系中加入PPase (#EF0221)可增加DNA合成量(8)。
Notice
Use of this enzyme in certain applications may be covered by patents and may require a license.