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phi29 DNA Polymerase

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  • Thermo scientific -fermentas
  • EP0091
  • 2025年11月03日
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      大量

    • - 热失活65°C, 10 min
    • - 重组酶
    Catalog# Size, concentration Supplied with: Certificate of Analysis MSDS
    10X Reaction Buffer
    EP0091 2.5 µg; 250 u (0.1 µg/µl); (10 u/µl) 0.25 ml EP0091
    EP0092 10 µg; 1000 u (0.1 µg/µl); (10 u/µl) 1.00 ml EP0092
    EP0094 50 µg; 5000 u (0.1 µg/µl); (10 u/µl) 5 x 1.00 ml EP0094
    Features

    • 在所有已知的聚合酶中,具有最高的合成持续性和链置换活性。最长可合成70 kb长度的DNA片段(1)。
    • 高准确性DNA合成(5)。
    • 高产量扩增DNA,即使微量模板也能高效扩增。
    • 扩增产物可直接用于下游应用,如PCR、限制酶切、SNP基因分型等。
    Applications

    • 滚环复制(RCA) (6):定期制备DNA 模板(7)。
    • 多重置换扩增(MDA) (8)。
    • 全基因组非偏好性扩增(WGA),见图1:
      一 DNA扩增,SNP (9)和STR (10)检测;
      一 从单细胞(11, 12)、致病生物或宏基因组(13)中无细胞扩增DNA;
      一 从滤纸的血迹标本(14)扩增DNA。
    • 测序DNA模板制备。
    • 蛋白引物介导的DNA扩增(15)。
    • 锁式探针原位基因型分析(17)。
    • 重组克隆(18)。
    • 无细胞克隆致死性DNA (19)。
    • RNA-primed DNA 扩增 (16)。
    说明
    phi29 DNA Polymerase是一种高持续扩增能力的聚合酶(最长达70 kb),具有很强的链置换活性,适合高效的等温DNA扩增(1)。此外,phi29 DNA Polymerase还具有单链DNA偏好的3’→5’外切酶(校正)活性(2),因此重点推荐使用3’-端修饰的引物 (4)。

    来源
    大肠杆菌菌株,含有Bacillus subtilis 噬菌体phi29来源的克隆基因2。

    分子量
    66.7 kDa,单体。

    活性单位定义
    1个活性单位是指在30°C、10分钟内将0.5 pmol dCMP合成掺入多聚核苷酸片段(吸附在DE-81上)所需的酶量。

    酶活性分析混合物:50 mM Tris-HCl (pH 7.5), 10 mM MgCl2 , 1 mM DTT, 0.01 mg/ml lambda DNA/HindIII, 0.2 µM dCTP (含[3 H]-dCTP), 0.2 mM dATP, 0.2 mM dGTP, 0.2 mM dTTP.


    特异性活性
    100,000 u/mg

    保存缓冲液
    保存缓冲液组分:
    50 mM Tris-HCl (pH 7.5), 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, 100 mM KCl, 0.5% (v/v) Nonidet P40, 0.5% (v/v) Tween 20和50% (v/v)甘油。

    10X 反应缓冲液
    330 mM Tris-acetate (pH 7.9, 37°C), 100 mM Mg-acetate, 660 mM K-acetate, 1% (v/v) Tween 20, 10 mM DTT。

    质量控制
    测试表明无内切脱氧核糖核酸酶污染。

    抑制与失活
    • 抑制剂:aphidicolin, N2 -(p-n -butylphenyl)-dGTP (BuPdGTP), 2-(p-n -butylanilino)-dATP (BuAdATP) (20)。
    • 失活:65°C加热10分钟。

    备注
    含有phi29 DNA Polymerase的反应体系中加入PPase (#EF0221)可增加DNA合成量(8)。

    Notice
    Use of this enzyme in certain applications may be covered by patents and may require a license.


    图1。phi29 DNA Polymerase催化非偏好性扩增人类基因组DNA。
    根据Dean et al., 2002 (9)的流程,phi29 DNA Polymerase扩增100拷贝(0.33 ng)人类基因组DNA。计算放射性[alfa-3 3P]-dATP渗入DE-81可吸收形式,定量分析扩增的总DNA。不同染色体上基因的扩增效率通过实时PCR仪器(ABI 7700)检测。

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    • Whole Genome Amplification with Phi29 DNA Polymerase to Enable Genetic or Genomic Analysis of Samples of Low DNA Yield

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