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- Thermo scientific -fermentas
- EP0061
- 2025年11月03日
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- 详细信息
- 技术资料
- 库存：
大量
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| Catalog# | Size, concentration | Supplied with: | Certificate of Analysis | MSDS |
| 5X Reaction Buffer | ||||
| EP0061 | 100 u (5 u/µl) | 0.35 ml | EP0061 | |
| EP0062 | 500 u (5 u/µl) | 2 x 1.00 ml | EP0062 |
- Features
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- 对单链DNA的3’=>5’外切核酸酶活性比双链DNA强；其3’=>5’外切核酸酶活性比DNA polymerase I, E.coli (1)和Klenow fragment高200倍。
- 在Fermentas公司所有限制酶、PCR和RT缓冲液中有活性。
- Applications
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- DNA末端平端化：5’-突出末端补平或3’-突出末端的切除(1, 2)。
- PCR产物3’-dA突出末端平端化。
- 置换反应合成标记的DNA探针(3)。
- 寡核苷酸介导的位点特异性突变(4)。
- 连接非依赖型克隆PCR产物(5, 6)。
说明
T4 DNA Polymerase是一种模板依赖型DNA聚合酶，催化单链DNA引物起始的5’=>3’合成。该酶具有3’=>5’外切核酸酶活性，但是缺乏5’=>3’ 外切核酸酶活性。
来源
含有T4噬菌体克隆基因43的大肠杆菌。
分子量
104 kDa，单体。
活性单位定义
1个活性单位是指在37°C，30分钟内将10 nmol脱氧核糖核苷酸掺入多聚核苷酸片段(吸附在DE-81上)所需的酶量。
酶活性分析混合物：67 mM Tris-HCl (pH 8.8), 6.7 mM MgCl2 , 1 mM DTT, 16.7 mM (NH4 )2 SO4 , 0.2 mg/ml BSA, 0.033 mM各种dNTP, 0.4 MBq/ml [3 H]-dTTP, 0.2 mM热变性和核酸酶处理的牛胸腺DNA。
保存缓冲液
保存缓冲液组分：
20 mM磷酸钾 (pH 7.5), 200 mM KCl, 2 mM DTT和50% (v/v)甘油。
20 mM磷酸钾 (pH 7.5), 200 mM KCl, 2 mM DTT和50% (v/v)甘油。
5X 反应缓冲液
335 mM Tris-HCl (pH 8.8, 25°C), 33 mM MgCl2 , 5 mM DTT, 84 mM (NH4 )2 SO4 。
质量控制
测试表明无内切脱氧核糖核酸酶污染。
抑制与失活
- 抑制剂：金属螯合剂、核苷酸类似物2(p-n-butylanilino)-dATP、N2-(p-n-butylphenyl)-dGTP)、SH-封闭混合物 (7)。
- 失活：75°C加热10分钟。
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