聚乙二醇细胞融合试剂盒

聚乙二醇细胞融合试剂盒产品说明书（中文版）

主要用途

聚乙二醇细胞融合试剂是一种旨在促进实验动物细胞合二为一的化学融合性介质和权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。其适用的细胞种类包括老鼠细胞株、人体细胞株、胚胎细胞株、肿瘤细胞株、悬浮细胞株、植物细胞株等。应用于融合杂交瘤细胞产生抗体，肿瘤细胞和人体树突状细胞融合产生免疫细胞，以及人鼠细胞融合产生染色体单体等。产品严格无菌，即到即用，细胞低毒性，融合效率高。

技术背景

作为化学融合剂之一的聚乙二醇（polyethylene glycol），其特定的分子量能够使细胞间或囊泡间脱水而造成细胞与细胞的紧密接触，促使细胞膜粘合一起。聚乙二醇对细胞广谱低毒性。它被证实是一种有效的代替病毒（Sendai）的融合剂，已成功用于植物细胞、动物细胞以及生殖细胞的融合。

产品内容

清理液（Reagent A） 毫升
融合液（Reagent B） 毫升
产品说明书 1份

保存方式

保存在4℃冰箱里，有效保证6月

用户自备

胰蛋白酶乙二an四乙酸混合液（YD12024）：用于细胞脱离
完全细胞培养液（YD12052）：用于细胞培养
50毫升锥形离心管：用于样品操作的容器
台式离心机：用于样品操作
75 cm²细胞培养瓶：用于融合细胞筛选和培养的容器

实验步骤

在实施细胞融合前，要选择好两个带有筛选标记的父代细胞株，例如一个带有HPRT缺陷型（YD10004试剂盒）且抗生素抗性的，另一个反之。存活的细胞杂合子具有HPRT和抗生素抗性。当开始下列操作之前，先将清理液（Reagent A）、融合液（Reagent B）、用户自备的完全细胞培养液放进37℃恒温水槽预热。然后开始下列操作。

1. 在融合操作前24小时，将两个75cm²细胞培养瓶里的父代细胞用胰蛋白酶乙二an四乙酸混合液脱离传代一次（注意：此步骤非常重要）
2. 次日，分别抽掉两个待融合的父代细胞培养瓶里（75cm²细胞培养瓶）的培养液
3. 分别加入xx毫升 清理液（Reagent A），清洗生长中的细胞表面
4. 分别抽掉5毫升清洗液
5. 分别加入3毫升用户自备的胰蛋白酶乙二an四乙酸混合液，铺满整个培养平面
6. 置入37℃培养箱3分种
7. 用手震动培养瓶，使细胞脱落，然后分别加入xx毫升清理液（Reagent A）
8. 充分混匀后，在血细胞计数器上进行细胞计数
9. 分别加入4 x 10⁶的两个父代细胞合并到一个50毫升锥形离心管
10. 放进台式离心机离心10分钟，速度为300g
11. 小心抽去上清液
12. 加入xx毫升清理液（Reagent A）
13. 混匀后，放入台式离心机离心10分钟，速度为300g
14. 小心抽去上清液，用手指轻轻弹击直至细胞颗粒群松散
15. 加入xx毫升融合液（Reagent B），充分混匀
16. 置于室温下1分钟
17. 加入xx毫升清理液（Reagent A）
18. 轻轻混匀后，放进台式离心机离心10分钟，速度为300 g
19. 小心抽去上清液
20. 加入用户自备的完全细胞培养液8毫升，充分混匀
21. 移入1毫升到1个75 cm²细胞培养瓶里（内加20毫升完全细胞培养液）

各2毫升分别到2个75 cm²细胞培养瓶里（每个内加20毫升完全细胞培养液）
5毫升到1个75cm²细胞培养瓶里（内加20毫升完全细胞培养液）

22. （选择步骤）如果需要，可以分别移入96孔培养板（每孔200微升）
23. 放进37℃细胞培养箱
24. 24小时后开始细胞筛选，直至获得融合杂合子细胞克隆（10至14天）

注意事项

1. 本产品为10次操作
2. 建议严格按照实验步骤进行操作，特别是融合液（Reagent B）与细胞混匀孵育时，严格控制孵育时间，避免聚乙二醇的细胞毒性作用，而影响融合效果
3. 所有冻存融合操作和使用工具均须在严格无菌状态下进行
4. 融合操作前，务必使待融合细胞进行胰蛋白酶乙二an四乙酸混合液脱离传代一次
5. 本公司提供 DMEM完全细胞培养液（YD12052）
6. 细胞筛选，通常10天后，出现存活的细胞克隆；采用96孔板可以获得无数单一克隆
7. 本公司提供系列细胞技术试剂产品

质量标准

1. 本产品经鉴定性能稳定
2. 本产品经鉴定无病毒和支原体污染
3. 本产品经鉴定能使植物细胞、动物细胞、人体细胞、人鼠细胞等融合成功率高达95％，可获得数百个杂合体细胞

使用承诺

上海羽哚生物秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。