肽 N-糖苷酶 F (PNGase F)

PNGase F (无甘油)
#P0705S   15,000 units    ¥1,329
#P0705L   75,000 units    ¥5,299

RNase B (对照底物)
#P7817S    250 µg           ¥669

糖苷内切酶反应缓冲液套装
10X G5 和 G7 反应缓冲液，
10X 糖蛋白变性缓冲液，
10% NP-40
#B0701S                        ¥129

♦ 去除糖蛋白的 N-连聚糖

♦ 无甘油糖苷酶产品适用于 HPLC

肽 N- 糖苷酶 F，即 PNGase F，是一种酰氨酶，可以在 N- 连糖蛋白的高甘露糖、杂合和复合寡糖部分最内侧的 N- 乙酰葡萄糖胺（GlcNAc）和天冬酰氨残基之间进行切割（1）。PNGase F 还以不含甘油的形式提供，便于在 HPLC 方法中取得最佳效果。

 

从脑膜败血性黄杆菌（Flavobacterium meningosepticum ）中提取纯化（2）。

于糖蛋白变性缓冲液（含 5% SDS，400mM DTT）中100 ℃ 煮沸 10 分钟使糖蛋白变性。再在加入 1%NP-40 的 1X G7 反应缓冲液 [50 mM磷酸钠（pH 7.5@ 25 ℃）] 中于 37 ℃ 温育，以进行酶切反应。

10X 糖蛋白变性缓冲液
10X G7 缓冲液
10% NP-40

~1,800,000 units/mg。

36 kDa。

无外切糖苷酶污染，无内切糖苷酶 F₁ 、F₂ 和 F₃ 活性。无污染的蛋白水解活性。

1 单位指在 10 μl 的反应体系中，37 ℃ 条件下1 小时 从 10 μg 变性 RNase B 中除去超过 95% 的碳水化合物所需要的酶量（65 NEB units = 1 IUB milliunit）。

500,000 units/ml。

PNGase F：50 mM NaCl，20 mM Tris-HCl（pH 7.5@ 25 ℃），5 mM Na₂ EDTA 和 50% 甘油。保存于-20 ℃。

PNGase F（无甘油型）：50 mM Nacl，20 mM Tris-HCl（pH7.5 @ 25 ℃），5 mM Na₂ EDTA，4 ℃ 保存，请勿冻存。

70 ℃ 10 分钟。

已知 PNGase F 的活性受 SDS 的抑制，所以在反应混合物中必须加入 NP-40。

要使天然糖蛋白去糖基化，或许需要增加酶量和延长温育时间。

(1) Maley, F.et.al.(1989) Anal.Biochem .,180, 195-204
(2) Plummer, T.H., Jr and Tarentino, A.L.(1991)Glycobiology , 1, 257-263