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- YDJ156
- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
参考说明书
- 保质期：
参考说明书
- 英文名：
参考说明书
- 库存：
大量
- 供应商：
上海羽朵
- 规格：
10/50/80次
甲基纤维素细胞克隆试剂盒产品说明书（中文版）
主要用途
甲基纤维素细胞克隆试剂是一种旨在模拟活体内（in vivo）细胞外基质的半固体生长环境，进行活体外（in vitro）探测评价和定量分析细胞纯系化生长的潜力（colony-forming-unit）和特性的常用细胞生长介质和权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。其特别适用于动物或人体造血干细胞和转化型体细胞的生长。产品严格无菌，即到即用，性能稳定，系统可靠，确保重复一致。
技术背景
采用半固体介质模拟活体内细胞生长环境进行活体外检测是细胞形态学研究的基本手段。第一建立一个使细胞可以悬浮或立体生长的空间；第二便于观察细胞生长潜能和形态来判断细胞性质：肿瘤细胞、转化型体细胞或悬浮细胞；第三易于分离由单细胞生长而成的特征性纯系细胞群落。作为半固体介质之一的甲基纤维素（Methylcellulose），在各种温度条件下，其性能稳定不变。
产品内容
克隆液（Reagent A） 毫升
产品说明书 1份
保存方式
保存在－20℃的冰箱里，严格无菌，有效保证6月
用户自备
50毫升锥形离心管：用于样品操作的容器
涡旋震荡器：用于混匀内容物
24孔细胞培养板：用于细胞培养的容器
倒置显微镜：用于观察细胞的形态
细胞β-半乳糖苷酶原位染色试剂盒（YD10010）：用于检测细胞β-半乳糖苷酶的活性
实验步骤
- 从－20℃冰箱里取出克隆液（Reagent A），置于4℃冰箱里解冻24小时（注意：切记此步不要摇动克隆液瓶）
- 克隆液完全解冻后，摇动克隆液瓶，混匀内容物
- 在室温下静置至少30分钟，使气泡大部分消失
- 放进37℃恒温水槽孵育15分钟
- 小心移出xx毫升克隆液（Reagent A）到50毫升锥形离心管（注意：避免气泡）
- 根据用户需要，可以加入生长因子和细胞因子等细胞生长营养成分
- 加入2.5毫升待测细胞（细胞终浓度约为每毫升104细胞）
- 摇动离心管，混匀内容物
- 在室温下静置20分钟，使气泡基本消失
- 分别移入24孔培养板，每孔1毫升（注意：可以用无菌移液管或5毫升针筒16号针头）
- 轻柔地转动平板使其均匀平铺，避免气泡
- 放进37℃细胞培养箱，确保培养箱湿润状态
- 造血干细胞培养2周，转化体细胞（例如肿瘤细胞）培养数天
- 通过倒置显微镜，识别和计量纯系细胞群落
- 需要时，可以进行X-gal染色
注意事项
- 本产品为80次（1个48孔细胞培养板）、50次（2个24孔细胞培养板）和10次（10个25cm2细胞培养瓶）操作
- 用户根据需要，调整试剂起始用量
- 所有操作，须严格无菌
- 细胞克隆培养的最佳细胞量根据用户的细胞类型调整
- 克隆液（Reagent A）建议在－20℃冰箱里保存
- 克隆液（Reagent A）避免反复冻融
- 用户可以使用不同的细胞培养容器，相应调整试剂使用量（见下表）
| 细胞培养容器 | 总容量 （每孔或瓶） |
克隆液（Reagent A）容量（每孔或瓶） | 待测细胞容量 （每孔或瓶） |
| 48孔细胞培养板 | 0.6毫升 | 0.4毫升 | 0.1毫升 |
| 24孔细胞培养板 | 1毫升 | 0.9毫升 | 0.1毫升 |
| 12孔细胞培养板 | 2毫升 | 1.8毫升 | 0.2毫升 |
| 6孔细胞培养板 | 3毫升 | 2.7毫升 | 0.3毫升 |
| 35 mm细胞培养皿 | 3毫升 | 2.7毫升 | 0.3毫升 |
| 25 cm2细胞培养瓶 | 5毫升 | 4.5毫升 | 0.5毫升 |
- 细胞培养时，注意避免干化
- 本公司提供系列细胞筛选试剂产品
质量标准
- 本产品经鉴定性能稳定
- 本产品经鉴定无病毒和支原体污染
- 本产品经鉴定适合各种造血干细胞，其重复率100％
上海羽哚生物秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。
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文献和实验【原创】基因组编辑三大工具ZFN、TALEN、CRISPR/Cas9筛选基因敲除细胞系阳性克隆Protocol
这些方面的进展。关于这些技术的具体原理和操作细节，请查看我之前的帖子附件详细介绍。不清楚的请联系我咨询。此贴主要谈一谈在用这些技术进行癌细胞株阳性细胞克隆筛选的过程中，如何进行阳性克隆筛选，为初次接触这些新技术的研究者提供一些参考意见。一般CRISPER-Cas9质粒转染后，采用有限稀释法接种到96孔板中长克隆，待到单个细胞长到几百到1000个细胞左右时，显微镜下仔细观察每一个孔的细胞，若发现非单克隆的细胞需要将其标注出来剔除筛选之外。传两代后，取出单个克隆的一部分细胞提取基因组DNA。分析敲除位点
受体多价结合，来传递激活信号。该方法最大的优势是在刺激过程中，能够通过加入 biotin 移除刺激试剂，达到精确掌控活化时间的目的。 2、实验步骤 小鼠脾脏淋巴细胞的分离与上面抗体法中步骤相同，当然，也可以选择用分选试剂盒进一步分选得到 T 淋巴细胞进行刺激。（注：如果选择提前富集T淋巴细胞，建议使用阴选试剂盒或可以去除分选试剂的阳选试剂盒） 1. 将 CD3 Fab-Strep、CD28 Fab-Strep、Strep-Tactin® Multimer 按照 1:1:1 的比例进行混合，4°
，一共需做480次定量PCR，即5个100次的试剂盒，5000-10000元。另外，每个基因的引物合成约150元，80个基因共12000元。所以共计2万左右。但真正做下来，估计至少3万。 2、基因表达部分，80个基因全部克隆，这个费用不太好算，要看基因了，商业公司卖的价格300-1000美元/克隆。常规基因克隆，做的越多，成本也就越低；我们经常做，但没有仔细算过，克隆的步骤也多，如果只算引物合成+试剂+测序成本的话，均摊下来的话我估计1000元一个克隆吧。
