MTT比色法细胞繁殖测定试剂盒

MTT比色法细胞繁殖定量检测试剂盒产品说明书（中文版）

主要用途

MTT比色法细胞繁殖定量检测试剂是一种旨在通过活细胞线粒体中的脱氢酶还原二甲基噻唑二苯基四唑嗅蓝（MTT）成蓝紫色的不溶性甲瓒颗粒，作为检测信号来比色定量测定活体细胞繁殖的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适用于各种生长中的真核生物细胞。产品严格无菌，即到即用，性能稳定，着色清晰。

技术背景

作为细胞染色剂之一的二甲基噻唑二苯基四唑嗅蓝（3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyl-tetrazolium bromide；MTT），简称噻唑盐染料，可以自由地进入活细胞中。细胞繁殖快，其代谢旺盛，线粒体琥珀酸脱氢酶的活性增强，从而还原细胞浆中的淡黄色外源性染料为不溶性、蓝紫色结晶产物而留存在细胞内，使用特定有机化物质溶解结晶颗粒而呈现出颜色深浅，在570nm波长下产生吸收峰：吸光值与细胞量成线性正相关，反映细胞活力。

产品内容

染色液（Reagent A） 毫升
溶解液（Reagent B） 毫升
产品说明书 1份

保存方式

保存在－20℃冰箱里，避免光照，有效保证6月

用户自备

酶标仪：用于定量检测染色细胞
移液排枪：用于同步加入染色试剂

实验步骤

实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒放在室温下融化,置于暗室里。然后进行下列操作。

一、贴壁细胞检测

1. 1. 从细胞培养箱里取出待测的96孔细胞培养板
   2. 确保96孔板中每一个孔含有100微升细胞培养液
   3. 小心加入xx微升染色液（Reagent A）到96孔板中每一个孔里
   4. 放进37℃培养箱里，孵育2小时（可见紫色结晶沉淀）
   5. 小心抽去每孔中含有染色液（Reagent A）的培养液（注意：确保培养孔中无任何液体残留）
   6. 小心加入xx微升溶解液（Reagent B）到96孔板中每一个孔里
   7. 放进37℃培养箱里，孵育20分钟
   8. 轻轻摇动96孔板，使其混匀
   9. 即刻放进酶标仪测读：波长570nm
   10. 绘制细胞生长曲线：纵座标（Y轴）为吸光值（OD）；横坐标（X轴）为细胞数

• 悬浮细胞检测
  1. 从细胞培养箱里取出待测的96孔细胞培养板
  2. 确保96孔板中每一个孔含有100微升细胞培养液
  3. 小心加入xx微升染色液（Reagent A）到96孔板中每一个孔里
  4. 放进37℃培养箱里，孵育4小时（可见紫色结晶沉淀）
  5. 放进孔板离心机离心10分钟，速度为300g
  6. 小心抽去每孔中含有染色液（Reagent A）的培养液（注意：确保培养孔中无任何液体残留）
  7. 小心加入xx微升溶解液（Reagent B）到96孔板中每一个孔里
  8. 放进37℃培养箱里，孵育1小时
  9. 轻轻摇动96孔板，使其混匀
  10. 即刻放进酶标仪测读：波长570nm
  11. 绘制细胞生长曲线：纵座标（Y轴）为吸光值（OD）；横坐标（X轴）为细胞数

注意事项

1. 本产品为500次（5个96孔细胞培养板）操作
2. 操作时须戴手套
3. 整个操作须无菌操作
4. 建议96孔板里的细胞量在1000至100000范围为理想状态
5. 孵育时，须避光
6. 建议使用无细胞空对照作为背景读数，通常吸光值为0.1
7. 悬浮细胞（例如血白细胞等）需使用孔板离心，确保理想效果
8. 如果悬浮细胞不采取离心，建议悬浮细胞检测中的实验步骤8延长孵育时间到2小时或更长
9. 如果酶标仪测读的读数过低，可以继续延长溶解液（Reagent B）的孵育时间到24小时
10. 如果没有570nm的酶标仪，可以使用550至600nm波长范围的滤波器替代
11. 可以使用其它培养板检测，相应调整染色液（Reagent A）的用量，培养液和染色液的用量之比为10：1
12. 本公司提供系列细胞繁殖和毒性检测试剂产品

质量标准

1. 本产品经鉴定性能稳定
2. 本产品经鉴定着色清晰

使用承诺

上海羽哚生物秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

友情提醒

IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。