Fpg

♦ 单细胞凝胶电泳（彗星试验）（4，5，6）

♦ 碱性析出（7）

♦ 碱解旋（8）

♦ 修饰的切刻平移技术（9）

Fpg（甲酰胺嘧啶[fapy]-DNA 糖基化酶）也称作 8-氧代鸟嘌呤 DNA 糖基化酶，既有 N-端糖基化酶活性也有 AP-裂解酶活性。N-端糖基化酶活性可以切下双链 DNA 上受损的嘌呤碱基，产生一个脱嘌呤（AP）位点。AP-裂解酶活性可以切割 AP 位点的 3'或 5' 端，因此可以除去 AP 位点，产生一个具有 3' 和5' 磷酸的碱基缺口。

被 Fpg 识别并切除的受损碱基包括：7，8-二羟基 8-氧代鸟嘌呤（8-氧代鸟嘌呤）、8-氧代腺嘌呤、fapy-鸟嘌呤、甲基-fapy-鸟嘌呤、fapy-腺嘌呤、黄曲霉毒素 B1-fapy-鸟嘌呤，5-羟基-胞嘧啶和 5-羟基尿嘧啶（1，2）。

克隆有 fpg 基因的重组 E. coli 菌株（3） 。

1X NEBuffer 1 + BSA [10 mM Bis Tris 丙烷-HCl，10 mM MgCl₂ ，1 mM DTT( pH7.0 @25°C)]。加入100 μg/ml BSA。37°C温育。

无核酸内切酶和外切酶污染。

1 单位指在 10 μl 反应体系中，37 ℃ 条件下，1 小时能够切割 1 pmol 含单个与胞嘧啶配对的8-氧代鸟嘌呤的 34 bp 寡核苷酸双链所需要的酶量。

在 10 μl 反应体系中 1X NEBuffer 1 中加入 10 pmol 荧光标记的寡核苷酸双链和 100 μg/ml BSA。

1:10³ ～1:10⁴   (4，5，6，10) 。详细步骤见www.neb-china.com 。

8,000 units/ml。

50mM NaCl，20 mM Tris-HCl (pH 8.0)，0.5 mM EDTA， 200 μg/ml BSA 和 50% 甘油。于 -20°C 贮存。

60°C 10分钟。

(1) Tchou, J. et al. (1994) J. Biol. Chem ., 269, 1518–1524.
(2) Hatahet, Z. et al. (1994) J. Biol Chem ., 269, 18814–18820.
(3) Boiteux, S. et al. (1987) EMBO J ., 5, 3177–3183.
(4) Singh, N. et al. (1988) Experimental Cell Research ,175, 184–191.
(5) Collins, A. et al. (1993) Carcinogenesis , 14, 1733–1735.
(6) Collins, A. et al. (1996) Environmental HealthPerspectives , 104, 465–469.
(7) Pflaum, M. et al. (1998) Free Rad. Res ., 29, 585–594.
(8) Hartwig, A. et al. (1996) Toxicology Letters , 88, 85–90.
(9) Czene, S. and Harms-Ringdahl, M. (1995) MutationResearch , 336, 235–242.
(10) Guthrie, E., New England Biolabs, Inc., unpublishedobservations.