快速连接试剂盒

快速末端平齐化™ 和快速连接试剂盒
#E0542S   20 次反应 . . . . . . . ¥1,769
#E0542L   100 次反应 . . . . . . ¥7,059

 ♦ 粘性或平齐末端连接仅需 5 分钟

♦ 连接反应在室温即可进行

快速末端平齐化试剂盒和快速连接试剂盒使您的克隆反应效率更高，同时购买节省15% 的开支。

本试剂盒可在室温(25°C)5分钟条件下，完成DNA片段粘性末端或平滑末端的连接反应。

• DNA 片段克隆入载体
• 文库构建
• TA 克隆
• Linker 连接
• 线性 DNA 的再环化

 

♦ 快速 T4 DNA 连接酶（重组酶）

♦ 2X 快速连接缓冲液

50 mM KCl，10 mM Tris-HCl（pH7.4），0.1 mM EDTA，1 mM DTT，和 50% 甘油。于 -20 ℃ 贮存。

132 mM Tris-HCl
20 mM MgCl₂
2 mM DTT
2 mM ATP
15% 聚乙二醇（PEG 6000）
pH 7.6 @ 25 ℃

按照以下步骤检测快速连接试剂盒连接产物的转化效率：

LITMUS 28 载体经 EcoRV 切割（平齐末端）或 HindIII 切割（粘性末端）后，用小牛肠碱性磷酸酶（CIP）处理，胶回收纯化。插入片段来自 φX174 DNA 的HaeIII消化产物（平齐末端）或 λDNA 的 HindIII 消化产物（粘性末端），插入片段和载体以 3：1 的比例，按照快速连接程序进行连接。所得连接产物直接进行转化实验。

每一批试剂盒均高于以下标准：
               转化率（转化子/μg）
               重新环化数             插入数
粘性末端   > 5 x 10⁶             > 1 x 10⁶
平齐末端   > 2 x 10⁶             > 1 x 10⁶
未切载体      2 x 10⁷

使用前完全混匀。避免反复冻融。

用快速连接试剂盒能使大多数连接反应在 25 ℃条件下 5 分钟甚至更短的时间内达到反应终点，超过这个时间效果并不会更好。事实上，连接两小时后转化效率便会降低，如果 25 ℃ 反应过夜，则转化效率会降至 75%。

电转化可以使转化效率提高几个数量级。在用快速连接反应产物做电转化以前，一定要降低 PEG浓度。我们推荐使用柱离心式 DNA 纯化方法。

快速连接进程曲线：LITMUS 28 载体经 EcoRV 切割（平齐末端）或 HindIII 切割（粘性末端）后，用小牛肠碱性磷酸酶（CIP）处理，胶回收纯化。插入片段来自 φX174 DNA 的 HaeIII 消化产物（平齐末端）或 λDNA的 HindIII 消化产物（粘性末端），插入片段和载体以 3：1 的比例，使用快速连接试剂盒进行连接。连接产物转化入化学方法制备的大肠杆菌感受态细胞，在 LB-amp 平板上 37 ℃ 生长过夜。