碱性磷酸酶 (CIP)

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货号#M0290S
更新日期2026年01月06日

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♦ 除去 DNA、RNA、rNTPs 和 dNTPs 5' 末端的磷酸基团

♦ 防止克隆载体的自身环化连接

♦ 蛋白质丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸的去磷酸化

♦ 为5' 末端标记准备模板

概述

碱性磷酸酶能催化除去DNA、RNA、三磷酸核糖核苷和三磷酸脱氧核糖核苷的5′磷酸基团。由于CIP处理后的DNA片段缺少连接酶所要求的5′磷酸末端，因此它们不能进行自连接(1)。这个特性可以在克隆时降低载体DNA的背景。

来源

小牛肠粘膜。

反应条件

1X NEBuffer 3
[100 mM NaCl, 50 mM Tris-HCl, 10 mM MgCl₂ ,1 mM DTT (pH 7.9 @25°C)]。

另外，CIP 在 NEBuffers 2、4 以及 EcoRI 和 BamHI 的反应缓冲液中均有活性。

质保声明

由 NEB 在芬兰的合作公司 Finnzymes Oy 对 CIP 进行核酸内切酶、外切酶和 RNA 酶污染的检测，质量控制在 Finnzymes Oy 公司进行，并经 NEB 认证。

单位定义

1单位指在1 ml反应体系中，37°C、1分钟催化1 μmo l的对硝基苯磷酸盐( pNPP)水解成对硝基酚(pNP)所需的酶量(2)。

活性检测条件

1 M 乙二胺-HCl ( pH 9.8)，0.5 mM MgCl₂ ，10 mM 对硝基苯磷酸盐，这些条件仅用于定量检测酶活力。

浓度

10,000 units/ml。

贮存条件

50 mM KCl, 10 mM Tris-HCl (pH 8.2), 1 mM MgCl₂ , 0.1 mM ZnCl₂ 和50%甘油，-20°C贮存。

热失活

无。

参考文献

(1) Sambrook, J., Fritsch, E.F. and Maniatis, T. (1989). Molecular Cloning: A Laboratory Manual , (2nd ed.), (p. 5.72). Cold Spring Harbor: Cold Spring Harbor Laboratory Press.
(2) Mossner, E., Boll, M. and Pfleiderer, G. (1980) Hoppe-Seyler’s Z. Physiol. Chem ., 361, 543–549.

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