DNA 聚合酶 I, (Klenow) 大片段 DNA Polymerase I, Large (Klenow) Fragment

DNA 聚合酶 I, (Klenow) 大片段 DNA Po

lymerase I, Large (Klenow) Fragment
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      DNA Polymerase I, Large (Klenow) Fragment

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    概述：
    DNA聚合酶I大片段(Klenow片段)是E. coli DNA聚合酶I的蛋白水解产物，具有DNA聚合酶活性和3´→5核酸´外切酶活性，但缺失了5´→3´核酸外切酶活性。Klenow既保留了聚合酶的高保真性，又不会降解5´末端DNA。
    来源：
    来源：来源于重组融合的E. coli polA基因，应用基因重组技术，将麦芽糖结合蛋白(MBP)基因取代了E. coli polA的5´→3´核酸酶外切结构域，表达的融合蛋白经切割并分离纯化去除MBP，获得Klenow片段，其氨基和羧基末端与常规方法制备的klenow片段相同。
    反应条件：
    1X NEBuffer 2 [50 mM NaCl, 10 mM Tris-HCl, 10 mM MgCl2 , 1 mM DTT (pH 7.9 @ 25°C)]。加入dNTPs (不随酶提供)。
    当添加dNTPs后，Klenow片段在四种NEBuffer和T4 DNA连接酶反应缓冲液中都有活性。
    质量保证：
    1 单位指 37 ℃条件下，30 分钟内使 10 nmol 的 dNTP 掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量。
    单位定义：
    1单位指在37°C条件下，30分钟内能使10 nmol 的dNTPs掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量。
    活性检测条件：
    1X NEBuffer 2中加入33 μM dNTPs，包括[3H]-dTTP和70 μg/ml的变性鲑鱼精DNA。
    浓度：
    5,000和 50,000 units/ml。
    贮存条件：
    25 mM Tris-HCl (pH 7.4),0.1 mM EDTA, 1 mM DTT和50%甘油，贮存于-20°C。
    热失活：
    75°C 20分钟。
    使用注意事项：
    由于该酶具有3´→5´核酸外切酶活性，升高反应温度、加入过量的酶、未加入dNTP或反应时间过长均会导致DNA末端碱基被切除形成凹陷。

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