1X phi29 DNA聚合酶缓冲液 [50 mM Tris-HCl(pH 7.5 @ 25°C), 10 mM MgCl2 ,
10 mM (NH4)2SO4,4mM DTT],加入200 μg/ml BSA。30°C温育。
单位定义:
1单位指30°C条件下,10分钟内使0.5 pmol的dCMP掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量。
活性检测条件:
50 Tris-HCl (pH 7.5), 10 mM MgCl2 , 4mM DTT, 0.2 mg/ml BSA, 0.01 mg/ml Hind III-消化的λDNA,0.2 μM dCTP 包括 32P dCTP、0.2 mM dGTP、0.2 mM dATP、0.2 mM dTTP和酶。
浓度:
10,000 units/ml。
贮存条件:
100 mM KCl, 10 mM Tris-HCl(pH 7.4), 0.1mM EDTA, 1 mM DTT, 0.5% Tween 20, 0.5% NP-40和50% 甘油。-20°C贮存。
热失活:
65°C 10 分钟。
参考文献:
(1) Blanco, L. and Salas, M. (1984) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81, 5325–5329. (2) Blanco, L. et al. (1989) J. Biol. Chem., 264, 8935–8940. (3) Garmendia, C. et al. (1992) J. Biol. Chem., 267, 2594–2599.