phi6RNA 聚合酶 (RdRP) phi6 RNA Polymerase (RdRP)

phi6RNA 聚合酶 (RdRP) phi6 RNA Po

lymerase (RdRP)
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      phi6 RNA Polymerase (RdRP)

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    ♦合成用于RNAi实验的双链RNA
    ♦以单链RNA为模版，从3 ´端合成双链RNA
    ♦非引物依赖型高效合成RNA
    ♦使用一个9 nt的短起动序列(initiator sequence)
    概述：
    phi6 RNA 聚合酶是 phi6 噬菌体 P2 蛋白经修饰后的产物，是一种 RN A 指导的 RN A 聚合酶（RdRP），可以从 3' 端开始，合成一条全长互补链，形成双链 RNA。该酶不需要任何寡核苷酸引物以启动合成。phi6 RdRP 是快速合成酶，可以单链或双链的 RNA 作为模版。模板 RNA 链最佳的起始位点需要 5' NNUUUUUUUUCC3' 序列（1-3）。
    来源：
    重组E. coli菌株，含有修饰过的 phi6 噬菌体P2 蛋白基因。
    反应条件：
    1X phi6 RdRP 反应缓冲液 [50 mM Tris-HCl（pH 8.9 @ 25 ℃），50 mM醋酸氨]，加入 1.5 mMMnCl2，ATP、UTP、CTP（不随酶提供）各 0.1-0.2 mM和GTP（不随酶提供）0.3-0.6 mM，32 ℃温育。
    随酶提供：
    10X phi6 RdRP 反应缓冲液
    50 mM MnCl2
    质量保证：
    无核酸内、外切酶和 RNase 污染，由芬兰的 Finnzymes 公司（NEB 的全球合作伙伴）纯化（专利申批中），质量控制由 Finnzymes 公司进行，NEB 公司验证。
    单位定义：
    1 单位指 32 ℃条件下，20 分钟催化1 nmol的 UTP 掺入酸不溶性沉淀物中所需要的酶量。
    活性检测条件：
    1X phi6 RdRP 反应缓冲液，1.5 mMMnCl2，10% DMSO，1 mM UTP，1 μg poly(rA) 及 1 μCi[3H]-UTP，30 μl 反应体系，32 ℃温育。
    浓度：
    1,000 units/ml。
    贮存条件：
    100 mM NaCl，50 mM Tris-HCl（pH 8.0），0.1 mM EDTA，0.1% Triton X-100 和 50% 甘油。-20 ℃贮存。

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