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- 2026年04月02日
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基因过表达细胞株技术背景
许多研究者在研究基因功能时，会同时进行基因干扰和基因过表达，让实验结论更严谨。基因过表达是指通过慢病毒、电转等细胞转染方式，在细胞内提高特定基因的表达水平，从而实现基因的功能增强（gain of function），基因过表达作为一种传统的分子生物学技术至今依然在生物学研究中发挥着重要作用。
赛业生物基因过表达服务介绍
赛业生物建立了一套成熟稳定的基因干扰表达的实验体系，可针对多种不同细胞（包括难转染细胞）为您提供基因过表达稳转细胞株的构建服务。
1、高调控效率
可实现几十、百倍的过表达水平，经调控后的表达显著升高。
2、性状稳定不恢复
我们构建的过表达细胞株，经过十几代甚至更高的细胞传代后，仍然维持稳定的过表达性状。
3、多种调控策略选择
针对不同的基因和细胞特征，可优选不同的实验体系，达到最佳调控效果。如：
| 实验方法 |
特点 |
| 慢病毒法 |
高感染效率，实现长期、稳定、显著的过表达效果。 |
| 转座子法 |
省去病毒包装和纯化过程，缩短实验流程；可装载上百kb的大基因片段。 |
4、详尽的结果交付
- 实验报告：含实验基本流程、载体报告、引物序列、稳转株鉴定结果等信息；
- 测序报告；
- 稳转细胞株2管/株（1×106细胞/管），包含对照细胞株；
- 剩余病毒（选）、甘油菌（选）。
基因过表达实验流程与周期示意图
服务优势
1. 丰富的成功经验：超千例项目成功案例，超200种细胞株成功案例，客户多篇文献引用发表。
2. 专业的项目管理：24h内快速出方案，定期反馈项目进展，博士团队技术支持，详尽的交付报告。
3. 严格的质控体系：双重检测细菌、支原体等微生物，100%确保无污染，并充分鉴定目的基因过表达效果。
4. 细胞到动物的整体服务方案：提供从细胞基因表达调控、细胞功能验证、小鼠疾病模型建立、到表型分析的全套服务。
成功案例
项目名称：构建mMaf基因过表达的小鼠单核巨噬细胞（RAW264.7）
1、mMaf慢病毒过表达载体设计：
2、病毒包装
将上述表达载体包装慢病毒并进行滴度检测，确保病毒质量满足后续实验要求。
3、小鼠单核巨噬细胞（RAW264.7）鉴定
细菌、真菌、支原体等检测，确保小鼠单核巨噬细胞（RAW264.7）无微生物污染；
4、病毒转导稳转株构建
mMaf过表达慢病毒和阴性空载慢病毒转小鼠单核巨噬细胞（RAW264.7），并使用嘌呤霉素药筛，最终获得1株过表达稳转细胞株和1株对照组稳转细胞株。细胞株各冻存2管，
细胞量1×106/管。细胞分组如下：
过表达组- Pn+4 -100x
对照组- Pn+4 -100x
5、qPCR 检测
mGapdh的溶解曲线
mMaf的溶解曲线
相对定量的方法检测目的基因的表达变化，按照2-ΔΔCT法对数据进行分析处理
| 样品名称 |
① |
② |
ΔΔCT （实验组-对照组） |
2-ΔΔCT |
表达效率 |
| mMaf |
mGapdh |
||||
| 过表达组 |
22.67 |
17.34 |
-7.27 |
155.02858 |
15502.86 % |
| 对照组 |
29.15 |
16.55 |
0 |
1 |
100.0% |
成功基因编辑细胞类型精选
| 分类 |
细胞名称 |
缩写 |
| 血液和淋巴系统 |
小鼠单核巨噬细胞白血病细胞 |
RAW 264.7 |
| 人B淋巴母细胞 |
HMy2.CIR |
|
| 人T淋巴细胞白血病细胞 |
HuT 78 |
|
| 人单核细胞白血病 |
THP-1 |
|
| 人慢性髓系白血病细胞 |
K-562 |
|
| 人原髓细胞白血病细胞 |
HL-60 |
|
| 人白血病T淋巴细胞 |
Jurkat, Clone E6-1 |
|
| 骨骼、皮肤系统 |
小鼠黑色素瘤细胞 |
B16 |
| 小鼠皮肤黑色素瘤细胞 |
B16-F10 |
|
| 人骨肉瘤细胞 |
U-2 OS |
|
| 人恶性黑色素瘤细胞 |
A375 |
|
| 人纤维肉瘤细胞 |
HT-1080 |
|
| 消化系统 |
小鼠结肠癌细胞 |
CT26.WT |
| 人回盲肠癌细胞 |
HCT-8 |
|
| 人结肠癌细胞 |
HCT 116 |
|
| HT-29 |
||
| 人结肠腺癌细胞 |
SW480 |
|
| 人结直肠癌细胞 |
LoVo |
|
| 人食管鳞癌细胞 |
KYSE-150 |
|
| 人胃癌细胞 |
HGC-27 |
|
| 呼吸系统 |
小鼠肺癌细胞 |
LLC |
| 仓鼠肺细胞 |
V79 |
|
| 人正常肺上皮细胞 |
BEAS-2B |
|
| 人大细胞肺癌细胞 |
NCI-H460 |
|
| 人非小细胞肺癌细胞 |
NCI-H1299 |
|
| A549 |
||
| 人肺鳞癌细胞 |
SK-MES-1 |
|
| NCI-H520 |
||
| 泌尿系统 |
小鼠肾小球系膜细胞 |
SV40 MES 13 |
| 大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞 |
PC-12 |
|
| 大鼠肾细胞 |
NRK |
|
| 非洲绿猴肾细胞 |
Vero |
|
| 恒河猴肾细胞 |
LLC-MK2 |
|
| 人膀胱癌细胞 |
5637 |
|
| 人前列腺癌细胞 |
PC-3 |
|
| 人胚肾细胞 |
293 Cells, low passage |
|
| 人肾细胞腺癌细胞 |
786-O |
|
| ACHN |
||
| 脑和神经系统 |
小鼠垂体瘤细胞 |
AtT-20 |
| 大鼠胶质瘤细胞 |
C6 |
|
| 人胶质瘤细胞 |
U251 |
|
| 人神经母细胞瘤细胞 |
SK-N-SH |
|
| 内分泌系统 |
小鼠乳腺癌细胞 |
4T1 |
| 人乳腺癌细胞 |
MCF-7 |
|
| MDA-MB-231 |
||
| 生殖系统 |
仓鼠卵巢细胞亚株 |
CHO-K1 |
| 人宫颈癌细胞 |
Hela |
|
| 人卵巢癌细胞 |
SK-OV-3 |
|
| 循环系统 |
小鼠成肌细胞 |
C2C12 |
| 大鼠成肌细胞 |
L6 |
|
| 大鼠心肌细胞 |
H9c2(2-1) |
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文献和实验株：1. 希望迅速观察目的基因过表达或者干扰效果；2. 2～4 天的瞬时表达已经可以达到具体的实验目的，比如检测两个外源转染的目的蛋白之间的相互作用；3. 细胞个体差异对实验结果有影响。那再来跟我汇报下什么是基因过表达、干扰或基因敲除？应该怎么选择？细胞：过表达就是把基因上调表达，即该基因被过度的转录、翻译，最终基因表达产物超过正常水平。做过表达要比做干扰难度高一些，过表达需要表达出长链的 mRNA，这一点比较困难，而干扰只需表达出短片段的 shRNA 即可。一般情况下，如果本身就是高表达，你再做过表达
目前慢病毒载体主要应用在以下几个方面： 细胞基因治疗（截止目前，已上市的 CAR-T 产品有 9 款采用了慢病毒载体递送 CAR 基因） 基因表达调控（过表达、RNA 干扰研究等） 基因编辑（CRlSPR/Cas9 gRNA 文库筛选、基因敲除、敲入、点突变、基因激活/抑制） 稳转细胞株构建 活体细胞成像追踪 转基因动物 图 1 慢病毒载体的主要应用方向 应用案例 案例 1：用慢病毒载体进行基因过表达，构建稳转细胞株，研究葡萄糖激酶在前列腺癌（PCa）中的作用[1] 细胞
activation mediator) 哦~~ 有时候，我们想知道基因产物定位怎么办？融合标签啊！怎么融合？同源重组修复能帮到你！Cas9 引入双链 DNA 断裂，同源介导修复（HDR）就能帮你把转进细胞的同源片段插入切割位点上！如果你转入细胞的同源片段包含荧光标签，几天过后你的细胞就可以亮了！如果你转入细胞的同源片段包含点突变，duang！一个目的基因突变细胞株也就这么构建成了！ 这只是 Cas9 技术的冰山一角，更多技术等待着你去了解，更更多的应用也等待着你去开发！
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