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赛业生物
技术背景
基因点突变是指将外源突变位点通过同源末端重组(HDR)的方式与基因组中特定位点进行替换,从而达到基因的定点突变并获得稳定遗传的一种技术。目前点突变的实现方式主要为CRISPR/Cas9系统联合Donor序列同时转入细胞,通过胞内的同源重组修复机制在Cas9切割位点处引入Donor序列上含有点突变位点的基因序列。

图 基因点突变原理
赛业点突变服务介绍
赛业生物提供基因点突变细胞株的构建服务,将人源化的Cas9蛋白、双靶点gRNA和Oligo DNA(donor DNA)三组分同时转染至目的细胞,产生高效同源重组,实现基因点突变。
1. 高同源重组效率
自主开发的Smart-CRISPR™细胞基因编辑系统,显著提高点突变细胞株构建过程中的高同源重组效率,并降低随机插入风险。
2. 丰富的项目经验
多种哺乳动物细胞构建成功经验,可根据客户的项目要求,采用不同的方法体系,确保高成功率。
3. 领先业内的服务周期
经大量测试和优化后的实验工艺,以最短的服务周期让客户拿到点突变纯合细胞。
实验流程

交付内容
1. 细胞鉴定报告
2. 实验报告(含载体报告、实验流程、测序原始数据等)
3. 点突变单克隆纯合子细胞株
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文献和实验的一种即可!是的,你没有看错,只要一种!方案概述:第一年 4 个地方,每个地方分别种植 5000 株 Shoepeg(玉米的一个地方品种),每个地方随机挑选 96 株进行基因型和表型分析。按照表型分别挑选两个地方 5% 极端高和矮的单株。第二年将 4 个地方分别挑选的极端个体在相同的地方再分别种 5000 株。然后分别从高和矮的两个种植点分别随机各挑选 96 个极端个体进行表型鉴定和 BSA 测序分析。GWAS+BSA 定位玉米株高 QTLGWAS 和 BSA 对玉米株高定位结果(其中 GWAS
activation mediator) 哦~~ 有时候,我们想知道基因产物定位怎么办?融合标签啊!怎么融合?同源重组修复能帮到你!Cas9 引入双链 DNA 断裂,同源介导修复(HDR)就能帮你把转进细胞的同源片段插入切割位点上!如果你转入细胞的同源片段包含荧光标签,几天过后你的细胞就可以亮了!如果你转入细胞的同源片段包含点突变,duang!一个目的基因突变细胞株也就这么构建成了! 这只是 Cas9 技术的冰山一角,更多技术等待着你去了解,更更多的应用也等待着你去开发!
受体钝化(receptor desensitization)
。体外培养时,加入PGE1后,cAMP升高后又下降,细胞发生钝化,同时也对其他cAMP途径的信号失去敏感。若将适应后的Gs和正常的Gs分别转移到Gs缺陷的突变细胞株的膜上进行对比观察,发现前者仍然钝化,而后者具有敏感性,因此,提示Gs发生了改变。
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