RNA提取+反转录

反转录 PCR 的原理及应用

法 RT—PCR 反应更加快速、灵敏，操作简便，污染率低，RNA 二级结构减少，并且因为聚合酶有校正活性，从而降低了 PCR 反应的错配率。而在两步法中，反应的精确度高，人为的误差相对较小，并且由于在第一步中将 RNA 反转录为 cDNA，从而更易于保存。 另外，两步法的整个过程比一步法更节省费用。传统检测方法的样品用量一般在 ug 级，而在 RT—PCR 检测系统中样品用量陡降至 pg 级。这就在很大程度上降低了实验操作的难度，特别是 mRNA 样品制备的过程得以简化。 3. 应用 对基因

反转录过程中需要考虑哪些因素？

为了研究 RNA 的功能，通常需要通过反转录过程将 RNA 转化为更稳定的互补 DNA（cDNA）。之后 cDNA 可通过分子克隆、PCR 和测序等技术做进一步的研究。因此，反转录过程是许多 RNA 实验研究流程的关键步骤。 为了获得更为准确的研究结果，本期总结了反转录过程中需要考虑的一些因素，以期能够抛砖引玉，给你的实验研究带来些许帮助。 本期内容 RNA 模板制备 基因组 DNA 的去除 反转录酶选择 引物选择 主要反应组分 反应温度和反应时间 第一链和第二链 cDNA 合成 注

如何提高反转录的灵敏度

1. 反转录的一般实验流程 2. 反转录反应的关键因素 · RNA提取方法的选择 · RNA质量的评价与鉴定 · 反转录引物类型的选择 · 反转录酶的选择