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舒桐生物科技
- 服务名称:
CRISPRa 预制稳转株、预制稳定细胞系
- 规格:
/套
预制稳定细胞系
舒桐医疗科技有限公司基于慢病毒,PB转座子,TALEN和CRISPR等技术,制备了一批高质量的稳定细胞株,涵括多种常用细胞系,可表达多种常用因子,如CRISPR-Cas9核酸内切酶、GFP荧光蛋白、荧光素酶、细胞骨架相关蛋白等,可作为理想的常用科研工具便于广大科研工作者的研究和药厂药物筛选开发。
CRISPRa 预制稳转株
催化失活的Cas9(dCas9)连上转录激活子,可以有效促进基因组特定位点的转录,这一工具被称为CRISPRa。CRISPRa预制稳转株为dCas9-VP64/MPH基因稳定表达的单克隆细胞株。这些细胞株稳定表达C端融合人密码子优化的dCas9的转录激活子VP64,同时也稳定表达激活辅助蛋白复合物MPH(MS2-p65-HSF1)。使用时只需简单地将启动子靶向的sgRNA或CRISPRasgRNA文库导入CRISPRa细胞系,是研究基因表达激活和基因筛选的理想工具。
CRISPRa 预制稳转株应用
(1)可以在不增加目的基因拷贝数的情况下,通过转录激活机制高效地过表达目的基因;(2)非常适合长链非编码RNA的功能机制研究;
(3)sgRNA文库的耐药性分析(激活某药物研究通路);
(4)细胞通路研究。
舒桐CRISPRa预制稳转株
| 产品名称 | 说明 |
|---|---|
| HEK293-SpdCas9-KRAB-puro-GFP | 慢病毒稳转的SpdCas9-KRAB细胞系 |
| HeLa-SpdCas9-KRAB-puro-GFP | 慢病毒稳转的SpdCas9-KRAB细胞系 |
| SiHa-SpdCas9-KRAB-puro-GFP | 慢病毒稳转的SpdCas9-KRAB细胞系 |
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文献和实验毒载体。 2.慢病毒包装与纯化 慢病毒包装采用三质粒或四质粒系统进行包装,收集细胞培养上清,通过超速离心浓缩纯化和收集病毒。 3.慢病毒滴度检测 检测方法:定量PCR检测干扰后细胞基因组中外源DNA拷贝数 实验原理:慢病毒介导外源基因以逆转录方式整合进目的细胞基因组 4.慢病毒载体优势 ① 表达时间长:慢病毒可将外源基因整合到宿主细胞基因组上,实现基因长时间稳定的表达,不随细胞分裂传代而丢失,是细胞实验的首选,常用于构建稳转株 ② 安全性高:未发现致病性,慢病毒载体改造T细胞用于CAR-T
慢病毒和质粒到底有什么区别?什么时候该用慢病毒什么时候用质粒
染的细胞系做质粒瞬时预筛确认方向,再上慢病毒做稳转和长期功能。 慢病毒包装前为什么要摸 MOI?慢病毒随机整合且成本较高,正式打目的病毒前先用带荧光对照病毒确定 MOI 和感染条件,能避免效率低和荧光弱。 从方案落地看,服务商应该具备什么能力? 如果你判断下来该用慢病毒(尤其难转染细胞、大基因、长期稳定表达),吉凯基因(GeneChem)是值得直接考虑的慢病毒包装品牌: 常规慢病毒成熟稳定:三质粒系统(pspAX2 + pMD2.G),广谱感染分裂/非分裂细胞,2-4 天表达、长期稳定,可建稳转株
场景: 【体外】构建稳定过表达/敲降/敲除的细胞系。 【体外】对原代细胞、干细胞进行长期的基因功能研究。 【体内】在某些需要长期表达且对免疫反应要求不极端的动物模型中 (如部分脑区注射),但需注意其扩散能力有限。 图 1.慢病毒包装、转导与基因整合[1]。 腺病毒——“高效瞬转的急性子” 腺病毒是无包膜的双链 DNA 病毒。它通过其纤维蛋白与细胞表面的柯萨奇-腺病毒受体 (CAR) 等结合进入细胞,但其 DNA 不整合到宿主基因组中
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